Аутоиммунные проявления у больных вирусными гепатитами (31.05.2010)

Автор: Умбетова Карина Туракбаевна

Больные острыми вирусными гепатитами обследовались двухкратно: в разгар клинических проявлений, на высоте выраженности интоксикационного синдрома (1 период) и в периоде ранней реконвалесценции, т.е. в момент клинического выздоровления, но на фоне отсутствия полной нормализации биохимических показателей функции печени (2 период). Больные хроническими вирусными гепатитами обследовались однократно.

В целях верификации этиологии вирусного поражения печени определялись серологические маркеры в сыворотке крови методом ИФА: HBsAg, anti-HBcor IgM, anti-HAV IgM, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG, anti-HDV IgM, anti-HDV IgG. Для дополнительного подтверждения диагноза ОВГС в сыворотке крови этой группы больных определяли белки core, NS3, NS4, NS5.

Активная репликация вируса у больных хроническим вирусным гепатитом С подтверждена полуколичественным методом ПЦР на HCV-РНК в сыворотке крови с определением генотипа вируса. Всем больным с хроническим вирусным гепатитом В был выполнен полуколичественный анализ для выявления HBV-ДНК методом ПЦР в сыворотке крови.

Методом непрямой иммунофлуоресценции установлены ASMA, AMA, ANA (набор реагентов ATS COMVI-I IMMCО Diagnоstic СШA). Anti-LKM-1 были определены методом иммуноферментного анализа (набор реагентов ImmuLisa Anti-Liver-Kindey Microcomal (аnti-LKM-1) Antibody ELAISA IMMCO Diagnostic СШA). Криоглобулины исследованы качественным визуализационным методом. Ревматоидный фактор (РФ) определялся в сыворотке полуколичественным методом латекс-агглютинации на слайде производства фирмы HUMAN (Германия) в соответствии с рекомендациями фирм производителей.

Для оценки цитокинового профиля у больных острыми и хроническими вирусными гепатитами изучена концентрация цитокинов (ИФН-?, ИФН-?, ФНО-?, ИЛ-1?, ИЛ-4, ИЛ-6) в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа (тест-системы ООО «Протеиновый контур» С-Петербург), а у больных с ХВГ также спонтанная и стимулированная NDV и ФГА продукции данных цитокинов МНПК. Иммунный статус у больных ХВГ изучен с помощью определения CD3, CD4, CD8, CD16, CD25, HLADR, CD20, CD38 антигенов методом иммунофлюоресценции. Данные исследования проведены в лаборатории клеточного иммунитета ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН (зав. лабораторией д.м.н., проф. М.В. Киселевский).

Больным с ХВГ проводилась аспирационная пункционная биопсия печени по Менгини с последующим гистологическим и морфологическим исследованием полученных биоптатов печени. Полученные гистологические препараты окрашивали гематоксилин-эозином для выявления лимфоидной инфильтрации печени и пикрофуксином по Ван-Гизону для выявления соединительной ткани. В лаборатории клеточного иммунитета ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН методом иммуногистохимии на криосрезах и иммуноцитохимии на мононуклеарных клетках, выделенных из биоптатов, определяли иммунофенотип клеток печени. Из мононуклеарных лейкоцитов гепатобиоптатов были приготовлены мазки, которые окрашивались эозин-азуром по Романовскому-Гимза и по Браше с контрольной обработкой РНК-азой. Световую микроскопию и фотографирование иммунных клеток печени в окрашенных мазках проводили с помощью фотовидеосистемы Axioplan 2 (фирмы Carl Zeiss, Германия).

Проводили традиционные общеклинические анализы крови и мочи, биохимическое исследование крови, а также по показаниям проводилось ультразвуковое исследование печени.

Таблица 1.

Распределение больных острыми вирусными гепатитами А, В, С и Д по тяжести течения заболевания, полу и возрасту.

Этиология и степень тяжести кол-во больных пол Возраст больных

(в годах) средний возраст

муж жен 15-20 21-30 31-40 41 и выше

А л/т 48 46 2 17 17 11 3 27,19±1,35

с/т 119 90 29 48 47 18 6 24,72±0,79

В л/т 21 19 2 5 13 2 1 25,33±1,42

с/т 104 89 15 39 45 16 4 24,80±0,72

С л/т 44 39 5 20 19 3 2 23,70±1,11

с/т 93 85 8 34 38 14 7 25,76±0,97

Д л/т 0 - - - - - - -

с/т 18 17 1 8 9 - 1 23,17±1,73

итого 447 385 62 171 188 64 24 25,09±0,40

Таблица 2.

Распределение больных хроническими вирусными гепатитами В и С по возрасту и полу.

Этиология и степень тяжести кол-во бол-х пол Возраст больных

(в годах) средний возраст

м ж 15-20 21-30 31-40 41 и >

В минимал. 6 5 1 1 4 - 1 27,0±4,34

низкая 4 3 1 1 2 1 - 24,5±3,66

умеренная 1 1 0 - - 1 - 31

С минимал. 46 37 9 9 13 7 17 36,2±2,25

низкая 35 26 9 5 11 5 14 37,9±2,85

умеренная 35 28 7 4 18 4 9 32,94±2,62

цирроз 28 14 14 - 2 2 24 54,36±2,70

Д низкая 1 1 - - 1 - - 21

умеренная 2 2 - - 1 1 - 32,0±2,82

цирроз 1 1 - - 1 - - 24

итого 159 118 41 20 53 21 65 38,10±1,34

Результаты клинических и лабораторных исследований внесены в карты индивидуального обследования. При статистической обработке результатов исследования количественные признаки выражались как M ± s (среднее ± стандартное отклонение). Частотные признаки (число лиц с наличием или отсутствием признака) выражались в процентах. Для выявления межгрупповых различий при условии нормального распределения количественного признака использовался критерий Стьюдента, в других случаях применялись методы непараметрической статистики: критерий (?, коэффициент корреляции Пирсона (r) и Спирмена (rS) Все различия считались достоверными при значении p<0,05. Статистическая обработка данных проводилась с использованием стандартного пакета программ Statistica for Windows (2000, версия 6.0) фирмы Statsoft Inc. и пакета программ Microsoft Exсel (2003) корпорации Microsoft.

Результаты исследований и их обсуждение.

В результате проведённого исследования, у больных ОВГА, ОВГВ, ОВГС и ОВГД нами установлено наличие аутоантител на раннем этапе клинических проявлений, в разгар интоксикации (в 1-ом периоде) и в периоде ранней реконвалесценции (во 2-ом периоде).


загрузка...