Экспериментально-клиническое обоснование выбора стратегии профилактики гриппозной инфекции в период подготовки к пандемии (28.12.2009)

Автор: Миронов Александр Николаевич

Новые технологии должны сыграть важную роль в разработке наилучшей вакцины против пандемического гриппа. Идеальная вакцина должна быть безопасной и высокоэффективной с точки зрения защиты во всех целевых группах, включая грудных детей и престарелых. Препарат должен содержать небольшое количество антигена вируса и храниться без охлаждения. И наконец, такая вакцина должна производиться в больших масштабах и недорого стоить [ВОЗ, 2005].

Стратегии производства эффективных вакцин, использующих меньшее содержание антигена, за счет включения в состав препарата адъюванта, могут привести к значительному увеличению производственного потенциала, но для этого необходимо проведение полномасштабных доклинических и клинических исследований, доказывающих безопасность и иммуногенность сконструированных препаратов.

Имея в виду изложенные аргументы, проведение целенаправленных фундаментальных и прикладных исследований по разработке и изучению свойств «макетных» пандемических вакцин против гриппа является актуальной проблемой.

Целью настоящей работы являлось экспериментально-клиническое обоснование выбора стратегии профилактики гриппозной инфекции в период подготовки к пандемии.

Задачи исследования:

1. Сконструировать живую и инактивированные потенциальные («макетные») препандемические гриппозные вакцины.

2. Изучить физико-химические и молекулярно-биологические свойства отечественных потенциальных («макетных») препандемических гриппозных вакцин.

3. Провести доклинические и клинические исследования живой гриппозной вакцины «Ультрагривак» и оценить их результаты.

4. Провести сравнительные доклинические и клинические исследования гриппозных инактивированных субъединичных вакцин «ОрниФлю» и «ВГИПС» и выбрать наиболее оптимальный вариант;

5. Провести доклинические и клинические исследования гриппозной инактивированной расщепленной виросомальной адсорбированной вакцины «АвиФлю» и оценить их результаты.

6. Разработать оптимальную стратегию вакцинации населения в период подготовки к пандемии.

Научная новизна. Впервые изучены свойства живой «Ультрагривак» и инактивированных субъединичной сорбированной «ОрниФлю» и расщепленной виросомальной сорбированной «АвиФлю» потенциальных («макетных») препандемических вакцин против гриппа.

В ходе проведенных исследований впервые:

- выбраны наиболее перспективные варианты потенциальных («макетных») препандемических вакцин против гриппа – живая «Ультрагривак», инактивированные адсорбированные - субъединичная «ОрниФлю» и расщепленная виросомальная «АвиФлю»;

- экспериментально обоснована необходимость применения двукратной схемы вакцинации с целью профилактики пандемического гриппа;

- в рамках доклинических исследований экспериментально доказана безопасность и иммунологическая эффективность живой «Ультрагривак» и инактивированных адсорбированных субъединичной «ОрниФлю» и расщепленной виросомальной «АвиФлю» потенциальных («макетных») препандемических гриппозных вакцин на лабораторных животных;

- в рамках клинических исследований экспериментально доказана низкая реактогенность, безопасность и иммуногенность живой «Ультрагривак» и инактивированных адсорбированных субъединичной «ОрниФлю» и расщепленной виросомальной «АвиФлю» потенциальных («макетных») препандемических гриппозных вакцин на добровольцах;

- разработаны и утверждены критерии реактогенности и иммуногенности живой «Ультрагривак» и инактивированной субъединичной адсорбированной «ОрниФлю» препандемических гриппозных вакцин.

- обоснованы схемы вакцинации населения РФ с целью специфической профилактики гриппа в случае возникновения пандемии: для живой вакцины «Ультрагривак» - интраназально двукратно с интервалом 10 сут в дозе не менее 7,5 lg ЭИД50; для инактивированной субъединичной адсорбированной вакцины «ОрниФлю» - внутримышечно двукратно с интервалом 28 сут в дозе 15 мкг НА.

Практическая значимость работы. Работа имеет большое народно-хозяйственное значение. В результате проведенной работы:

- доказана эффективность технологических подходов при конструировании безопасных и эффективных живой и инактивированных вакцин против пандемического гриппа;

- выбраны наиболее оптимальные конструкции вакцин для защиты населения РФ от пандемии гриппа - живая вакцина «Ультрагривак»; инактивированные адсорбированные субъединичная «ОрниФлю» и расщепленная виросомальная «АвиФлю»;

- по результатам исследований оформлены НТД, зарегистрированы и разрешены к применению в РФ живая интраназальная вакцина «Ультрагривак» (ЛСР-002340/09 от 25.03.2009) и инактивированная субъединичная адсорбированная вакцина «ОрниФлю» (ЛСР-001481/09 от 03.03.2009);

Результаты и выводы диссертации могут быть использованы при разработке средств профилактики и лечения инфекционных заболеваний, имеющих пандемический потенциал.

Внедрение результатов работы. По теме работы разработана НТД (ФСП, инструкция по применению, регламент производства) на живую гриппозную вакцину «Ультрагривак», гриппозные инактивированные адсорбированные субъединичную «ОрниФлю» и расщепленную виросомальную «АвиФлю».

В марте 2009 г. в РФ зарегистрированы и разрешены к применению две «макетные» пандемические гриппозные вакцины:

- инактивированная субъединичная адсорбированная «ОрниФлю» (ЛСР-001481/09 от 03.03.2009);

- живая «Ультрагривак» (ЛСР-002340/09 от 25.03.2009).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 21-22 ноября 2006 г.), Международном семинаре-тренинге «Актуальные вопросы защиты населения от биологических угроз» (Москва, 17-19 октября 2007 г.), Шестой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 12 октября 2007 г.), Всероссийской научной конференции «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 17-18 апреля 2008 г.), Международной научно-практической конференции «Проблемы совершенствования межгосударственного взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа» (Новосибирская обл., Кольцово, 9-10 октября 2008 г.), IV научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицинской биотехнологии» (Краснодарский край (пос. Джемете), 9-12 сентября 2008 г.), Проблемной комиссии РАМН «Грипп и гриппоподобные инфекции, включая особо опасные. Фундаментальные и прикладные аспекты изучения. (Санкт-Петербург, 19 февраля 2009 г.), VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ. II Всемирный форум по астме и респираторной аллергии (Санкт-Петербург, 26-28 апреля 2009 г.), Международной конференции «Актуальные проблемы в области развития и внедрения противогриппозных вакцин и вакцин против гриппа птиц» (г. Иркутск, 14-15 мая 2009 г.), Х международном конгрессе, посвященном 100-летию со дня рождения академика АМН А.Д.Адо «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», г. Казань, 20-23 мая 2009 г).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 56 печатных работ, в том числе в 15 журналах, рекомендованных ВАК и в 41 тезисе докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 482 страницах текста, включая 129 таблиц и 34 рисунка; состоит из введения, трех глав обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, который содержит 317 источников, из них 24 отечественных и 293 – иностранных.

Личный вклад автора. Тема и план диссертации, ее основные идеи и содержание разработаны автором на основании проведенных исследований. Проекты конструирования, планирование и проведение доклинических и клинических исследований препандемических гриппозных вакцин проведены при непосредственном участии автора. Автор принимал личное участие в заседаниях ВОЗ, Проблемной Комиссии и Комиссии по гриппозным вакцинным и диагностическим штаммам по вопросам, связанным к подготовке к пандемии гриппа. Во всех совместных исследованиях по теме диссертации, наряду с личным участием в их проведении, автору принадлежит участие в анализе полученных данных. Все материалы, использованные в диссертационной работе, проанализированы и обобщены лично автором.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалы:

Вакцинные штаммы

При конструировании «макетных» пандемических вакцин использованы два вакцинных штамма, рекомендованных ВОЗ, полученные методом обратной генетики и один штамм, разработанный в РФ, на основе апатогенного утиного штамма Н5, полученный методом классической рекомбинации (реассортации).

Штамм NIBRG-14(A/Vietnam/1194/2004 (H5N1), клайд 1, предоставлен Национальным институтом биологических стандартов и контроля (NIBSC), Великобритания. Штамм А/Indonesia/5/2005, клайд 2.1., получен из Института по контролю за заболеваниями (CDC), США.

Реассортанты NIBRG-14(A/Vietnam/1194/2004(H5N1) и А/Indonesia/5/2005 (H5N1) разработаны на основе штамма А/PR/8/34(Н1N1) и содержали модифицированные методами обратной генетики HA и NA. Соотношение генов в штаммах 6:2, история пассирования - клеточная культура VERO – 1 пассаж, РКЭ - 2 пассажа.

Методом классической рекомбинации, в ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, подготовлен вакцинный штамм А/17/утка/Потсдам/86/92(Н5N2)[17/Н5], на основе апатогенного утиного штамма вируса А/утка/Потсдам/1402-6/86(Н5N2) и холодоадаптированного донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2). Соотношение генов в вакцинном штамме А/17/утка/Потсдам/86/92(Н5N2)[17/Н5] - 7:1, с историей пассирования - 7 пассажей в РКЭ в процессе реассортации.

Субстрат накопления


загрузка...