Патогенетическое обоснование дифференцированной коррекции лейкопений при миелосупрессиях (27.01.2012)

Автор: Мирошниченко Лариса Аркадьевна

При исследовании пула кроветворных предшественников оказалось, что указанные изменения в отделе морфологически распознаваемых миелокариоцитов у мышей, леченных глицирамом, обусловлены стимуляцией накопления в костномозговой ткани грануломоноцитарных (5-е и 14-е сут) клеток-предшественников, а также усилением их пролиферативной активности на 5, 6-е и 10-е сут эксперимента. Соответствующее повышение ИП отмечено для гемопоэтических прекурсоров и КОЕ-ГМ в S-фазе митотического цикла (табл. 2). Индекс созревания гранулоцитарных прекурсоров увеличивался на 10-е сут опыта. Параллельно наблюдалось активное восстановление количества ГО, содержащих стромальную клетку (начиная с 10-х сут наблюдения).

Изучение механизмов гемостимулирующего эффекта глицирама показало, что он существенно не влиял на продукцию костномозговыми нуклеарами колониестимулирующей активности. Возрастание её секреции отмечалось только со стороны адгезирующих миелокариоцитов на 10-е сут наблюдения. При этом наблюдалось снижение уровня КСА в сыворотке периферической крови в группе с глицирамом на 4-е, 6-10-е и 16-е сут эксперимента. Обнаружена высокая степень координации между увеличением темпов деления предшественников и секреторной активностью адгезирующих (r=0,880) клеток костного мозга (рис. 2). Также обращает на себя внимание возникновение коррелятов между показателями гуморальной составляющей системы локальной регуляции и отделом морфологически распознаваемых клеток (рис. 2).

Анализ динамики репарационных процессов на фоне действия глицирама после введения 5-ФУ позволяет предположить, что его гемостимулирующий эффект реализуется на уровне элементов кроветворного микроокружения, и в частности, клеток адгезирующей фракции костного мозга, что влечет за собой активацию процессов пролиферации клеток-предшественников грануломоноцитопоэза.

Проведенные эксперименты позволили установить, что введение Г-КСФ после цитостатического воздействия повышало содержание незрелых (4-6-е сут) и зрелых (5-е, 8-12-е сут) форм нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге опытных животных. При анализе миелограмм было зарегистрировано также существенное увеличение числа моноцитов на 5-е, 10-14-е сут и лимфоидных клеток (с 4-х по 5-е сут наблюдения).

Сравнительное изучение периферической крови мышей обеих групп вы- явило существенно больший подъем количества палочкоядерных нейтрофильных гранулоцитов у мышей, получавших 5-ФУ совместно с Г-КСФ, с 10-х по 16-е сут включительно, а также моноцитарно-макрофагальных клеток – на 12-16-е сут наблюдения.

Следует отметить, что введение гемопоэтина практически не оказывало стимулирующего влияния на выход сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов в периферическую кровь на протяжении всего периода наблюдения. При этом изучение ИП, характеризующего влияние исследуемого препарата на динамику морфологически распознаваемых клеток, выявило его изменение только для моноцитов костного мозга и периферической крови (табл. 2).

Применение Г-КСФ вызывало значительное увеличение содержания в костном мозге гранулоцитарных прекурсоров. Количество КОЕ-ГМ в кроветворной ткани опытных животных существенно превышало аналогичный показатель у мышей контрольной группы на 4, 8, 14-е и 16-е сут эксперимента. Достоверное ускорение созревания КОЕ-ГМ после применения цитокина наблюдали на 4, 8, 12-е и 16-е сут, а увеличение пролиферативной активности – на 4-е и 14-е сут опыта.

Таблица 2. Величины интегрального показателя (% от исходного уровня), характеризующие влияние пантогематогена, Г-КСФ, глицирама и D-глюкуроновой кислоты на систему крови мышей линии CBA/CaLac после введения 5-фторурацила в МПД

Показатели 5-фторурацил Панто-гематоген Глицирам Г-КСФ D-глюкуро-новая кислота

Морфологически распознаваемые клетки периферической крови

ОКЛ 64,62 111,37 57,31 74,85 94,03

СНГ 68,39 143,34 81,13 70,08 89,48

Лимфоциты 73,81 92,60 63,43 74,6 90,39

Моноциты 71,29 329,62 20,37 114,35 122,22

Морфологически распознаваемые клетки костного мозга

ОКК 45,38 40,65 54,195 35,16 28,93

ННГ 73,74 31,22 86,78 33,889 27,81

ЗНГ 39,99 52,84 46,40 54,13 42,27

Лимфоциты 54,09 58,78 71,26 49,54 20,32

Моноциты 80,56 229,36 79,86 131,25 89,51

Пул кроветворных клеток-предшественников

КОЕ-ГМ 125,23 145,80 140,31 152,15 153,27

S-КОЕ-ГМ 88,53 82,05 171,85 63,07 158,66

ИД-КОЕ-ГМ 92,43 97,65 91,25 110,15 61,51

Структурно-функциональная организация костного мозга

ГО 103,43 64,29 93,86 54,60 87,03

М(–)ГО 80,75 66,71 87,20 54,60 89,68

Г-ГО 149,21 105,34 126,01 78,46 137,78

Уровень гемопоэтинов в биологических жидкостях

КСА ад 121,87 321,43 90,37 162,50 96,87

КСА неад 618,75 457,14 690,81 587,5 675,00

КСА сыв 55,95 61,71 39,88 48,58 55,27

Примечание: <100% – ингибирующее действие препарата; >100% – стимулирующее влияние препарата

Активация гранулоцитопоэза происходила на фоне некоторого усиления продукции колониестимулирующей активности адгезирующими и неприлипающими кариоцитами на 4-е и 16-е сут наблюдения соответственно в группе мышей, получавших Г-КСФ после однократного применения цитостатика. При этом регистрируемые изменения ИП (162,50 и 587,50%) по данным показателям в группе леченных препаратом были незначительными по сравнению с цитостатическим контролем (121,87 и 618,75% соответственно) (табл. 2). Уровень КСА сыворотки достоверно превышал величину такового в контроле только на 6-е сут после применения Г-КСФ.

Более существенный вклад в стимуляцию восстановления гранулоцитопоэза вносило активное образование в костном мозге ГО с центрально расположенной макрофагнегативной клеткой в результате применения гемопоэтина, наблюдавшееся после периода угнетения данного показателя (4-8-е сут), и регистрировавшееся, начиная с 10-х сут и до конца эксперимента. Аналогичной была динамика изменения количества гранулоцитарных островков при изучении их качественного состава. Проведенный интегральный и корреляционный анализ подтвердил важную роль описанных выше взаимодействий всех отделов кроветворения в восстановлении подавленного цитостатиком гранулоцитопоэза, а именно, сопряжения процессов пролиферации с накоплением гемопоэтических прекурсоров и их дифференцировкой в зрелые миелокариоциты с количеством ГО (табл. 2, рис. 2).

Таким образом, введение Г-КСФ на фоне миелосупрессии, вызванной введением 5-ФУ, стимулирует, как и при применении пантогематогена, восстановление гранулоцитарного и моноцитарного ростков гемопоэза. При этом эффект Г-КСФ закономерно обусловлен в первую очередь активацией колониеобразующей способности, непосредственной стимуляцией дифференцировки гемопоэтических предшественников и морфологически дифференцируемых миелокариоцитов. Нарушение функционирования ГИМ (вследствие мощного деструктивного действия 5-ФУ) не позволяет реализовать Г-КСФ свою гемостимулирующую активность в полной мере [Гольдберг Е.Д. и др., 1999.]. Этим во многом обусловлено нарушение нормального выхода зрелых клеток, в первую очередь, гранулоцитов, из костного мозга в периферическую кровь.

Изучение динамики показателей костномозгового кроветворения у мышей после курсового применения D-глюкуроновой кислоты на фоне 5-ФУ показало снижение общего количества миелокариоцитов (ОКК) по сравнению с контрольными животными на 4-е, с 8-х по 16-е сут (включительно). Однако при подсчете миелограмм было выявлено увеличение числа незрелых (4-6 сут) и зрелых (5-е и 12-е сут) нейтрофильных гранулоцитов по сравнению с контрольной группой. Абсолютное количество лимфоидных клеток в костном мозге опытных животных было снижено на протяжении всего периода наблюдения. Повышение содержания моноцитов наблюдалось только на 14-16-е сут исследования. Наблюдаемое на 6-е, 8-е и 12-16-е сут увеличение ОКЛ в группе мышей, леченных D-глюкуроновой кислотой, обусловлено в основном увеличением числа циркулирующих лимфоцитов, и лишь к 16-м суткам эксперимента – повышением содержания в периферической крови моноцитов и палочкоядерных нейтрофильных гранулоцитов. Следует отметить, что вычисление ИП для отдела морфологически распознаваемых клеток показало стимулирующее влияние D-глюкуроновой кислоты только на динамику количества костномозговых моноцитов (табл. 2).

Указанные изменения сопровождались повышением содержания в костном мозге прекурсоров грануломоноцитопоэза на 4-е, 14-е и 16-е сут опыта у животных, получавших D-глюкуроновую кислоту, что связано, вероятно, с более высокими темпами пролиферации кроветворных предшественников на 4-е и 6-е сут и снижением интенсивности созревания КОЕ-ГМ во все сроки исследования, что подтверждает увеличение ИП для гемопоэтических прекурсоров (153,27% при 125,23% в контроле) и КОЕ-ГМ в S-фазе клеточного цикла (158,66% при 88,53% в контроле) (табл. 2).

D-глюкуроновая кислота практически не изменяла продукцию гуморальных активностей прилипающими элементами костного мозга, но вызывала подъем уровня КСА в супернатантах от неприлипающих миелокариоцитов на 4, 5-е и 16-е сут эксперимента. Результатом описанных изменений явилось увеличение ИП для гемопоэтинов, продуцируемых неадгезирующими клетками костного мозга, до 675% при контрольных 618,75% (табл. 2). Влияние препарата на КСА периферической крови выражалось в возрастании уровня исследуемого показателя на 5-е и 12, 14-е сут по сравнению с аналогичной величиной в группе с применением одного цитостатика. Корреляционное взаимодействие, возникающее между костномозговыми нуклеарами, клеточными элементами грануломоноцитарного ростка в периферической крови и продукцией сывороточной КСА, свидетельствует о важной роли дистантных факторов в регуляции кроветворения в данных условиях.

Увеличение общего количества гемопоэтических островков в кроветворной ткани мышей, леченных D-глюкуроновой кислотой, за счет выхода структурно-функциональных ассоциаций, содержащих в своем составе стромальную клетку, отмечалось на 10-е и 16-е сут эксперимента. Изучение качественного состава ГО выявило усиленное образование гранулоцитарных и смешанных ГО в эти же сроки исследования. Появление новых корреляционных связей между морфологически распознаваемыми клетками грануломоноцитарного отдела гемопоэза и усилением формирования ГО доказывает зависимость увеличения числа миелокариоцитов в костном мозге и полиморфоядерных лейкоцитов, моноцитов в периферической крови от восстановления D-глюкуроновой кислотой структурно-функциональной целостности костного мозга мышей, перенесших введение 5-ФУ (рис. 2)


загрузка...