Технология производства и обеспечение качества синбиотиков ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ. эффективность их применения в птицеводстве (26.09.2011)

Автор: Неминущая Лариса Анатольевна

Биомасса дрожжей исследуемого штамма исследована по химическому составу в сравнении с другими белковыми кормовыми добавками (табл.2).

Таблица 2

Состав различных белковых кормовых добавок

Показатель, единицы

измерения Подсолнечн. шрот Соевый шрот Дрожжи кормовые Рыбная мука ВКПМ-?-1218

Сырой протеин, % 38 45 45 60 45

Клетчатка, % 15 7 1,5 1 8

Лизин, % 1,2 2,7 2,9 4,7 3,07

Метионин, % 0,68 0,61 0,54 1,7 1,13

Триптофан, % 0,45 0,59 0,62 0,60 0,37

Фосфор, % 0,9 0,63 1,32 3,5 0,88

В1, мг/кг 3,2 3,1 16 1 38,7

В2, мг/кг 3,1 3,8 40 11 239,4

В3, мг/кг 13 16 60 17 67,8

В4 ,мг/кг 2300 2500 2800 3500 1040

В5, мг/кг 240 40 250 90 234

В6, мг/кг 11 5 30 4 29

В12, мг/кг - - - - 34

А, мг/кг - - - - 88,5

Д, мг/кг - - - - 119,2

Е, мг/кг - - - - 585

С, мг/кг - - - - 168

К, мг/кг - - - - 0,45

Обменная энергия, ккал/кг 2670 2500 2800 2810 2890

Переваримость белка, % 86 90 88 90 86,5

Показано, что по питательной ценности биомасса аналогична соевому и подсолнечному шротам, по содержанию белка уступала только рыбной муке, в отличие от других кормовых добавок содержала витамины В12, А, Д, Е, С и К.

Таким образом, установлено, что выбранные штаммы отвечают предъявляемым к ним требованиям и могут служить продуцентами при разработке препаратов пробиотиков, пребиотиков и кормовых добавок с пребиотическими свойствами.

Изготовление и контроль посевного материала.

Согласно современным требованиям (ГОСТ Р 52249-2009, ГОСТ Р 2001-2008) разработка системы изготовления и методов контроля посевного материала, используемого в технологическом процессе производства биопрепаратов, является обязательным условием обеспечения их качества. Реализация стандартной процедуры изготовления и контроля посевного материала позволяет: 1) гарантировать идентичность исходному штамму характеристик и свойств материала, используемого для изготовления конечного продукта; 2) разработать методы контроля безопасности, активности и стабильности препарата; 3) включить данную процедуру в виде самостоятельного документа в технологические регламенты производства. В отечественной практике разработки и производства лекарственных средств для ветеринарии и кормовых добавок для животных системный подход к данной процедуре не имеет широкого распространения, поэтому его реализация является актуальной.

Система посевных материалов (Seed lot system, S.l.s.) – это технологическая система, в которой последовательные серии промежуточных продуктов (вирусной или микробиологической природы) получают посредством установленного количества пересевов (пассажей). Она состоит из главного (Master seed, M.s.), рабочего (Working seed, W.s.) и производственного посевного материала (Production seed, P.s.), предназначенного только для производства серии конечной продукции. Последовательность получения посевного материала: Master seed ? Working seed ? Production seed. Для изготовления небольших объемов продукции допускается использовать непосредственно рабочий посевной материал.

Микроорганизмы выбранных штаммов-продуцентов культивировали в соответствии с условиями, указанными в паспорте на данный штамм. Полученные культуры контролировали микроскопированием на отсутствие посторонней микрофлоры и подлинность (культурально-морфологические признаки), стабилизировали путем сублимационного высушивания с защитной средой ОМ (M.s. - в ампулах по 1 см3, W.s. - в пенициллиновых флаконах по 2 см3) по режимам, разработанным при участии доктора биологических наук Нежуты А.А. Готовый посевной материал (M.s. и W.s.) контролировали по показателям подлинности, безопасности и активности, а M.s. - дополнительно на соответствие основным характеристикам штамма. Для характеристики безопасности определяли: контаминацию посторонней бактериальной и грибковой микрофлорой, безвредность для цыплят суточного возраста и токсичность для развивающихся SPF-эмбрионов кур (РЭК) с использованием разработанного нами теста эмбриотоксичности. Активность пробиотиков оценивали по количеству жизнеспособных бактерий, антагонистической активности in vitro, резистентности к антибиотикам. Полученные серии хранили: M.s. - 5 лет при температуре ? - 400С, W.s. - 18 месяцев при температуре 8-100С.

3.2.1. Посевной материал L. acidophilus для пробиотика АВИЛАКТ-1К. M.s. представлял собой 2-й пассаж коллекционного штамма, W.s. - 3-й пассаж M.S. Изготовлено 300 ампул серии M.s. и 3 серии W.s. по 300 флаконов каждая. Одна серия W.s. использована в качестве лабораторного рабочего эталонного материала (ЛРЭМ) для стандартизации определения количества жизнеспособных лактобактерий и исследования их термостабильности. Контроль изготовленных серий M.s.и W.s. показал: 1) отсутствие контаминации посторонней микрофлорой; 2) отсутствие эмбриотоксичности; 3) безвредность для цыплят суточного возраста (при однократном выпаивании дозы препарата, составляющей 0,5 и 1,0% суточного количества корма); 4) соответствие показателей активности характеристикам, определенным для коллекционного штамма; количество жизнеспособных лактобактерий составило не менее 5,0х108 КОЕ/г. Для M.s. установлено соответствие паспортным характеристикам по культурально-морфологическим признакам и чувствительности лактобактерий к действию желудочного сока и желчи.

3.2.2. Посевной материал B. subtilis для пробиотика АВИСУБТИЛ. M.s. - 2-й пассаж коллекционного штамма, W.s. - 2-й пассаж M.s. Изготовлено 300 ампул серии M.s. и 2 серии по W.s 300 флаконов. Контроль изготовленных серий M.s.и W.s. показал: 1) их безопасность; 2) соответствие показателей активности характеристикам, определенным для коллекционного штамма; количество жизнеспособных бациллобактерий – не менее 5х109КОЕ/г. M.s. дополнительно контролировали на соответствие паспортным характеристикам штамма и отсутствие токсигенности, вирулентности, острой и хронической токсичности по методикам, использованным при характеристике штамма.

3.2.3. Посевной материал гриба F. sambucinum для пребиотика АВИСТИМ. M. s. - 2-й пассаж коллекционного штамма, W.s. - 2-й пассаж M.s. Изготовлено 300 ампул серии M.s. и 2 серии W.s. по 300 флаконов. Готовый посевной материал (M.s. и W.s.) контролировали по культурально-морфологическим признакам, содержанию сырого протеина в биомассе, активности (продуктивности) штамма и показателям безопасности. Культуральную жидкость (КЖ) M.s. характеризовали по содержанию органических кислот, сухих веществ, величине рН. Безопасность КЖ дополнительно характеризовали по потенциальному раздражающему действию на слизистые оболочки ЖКТ с использованием ХЕТ-КАМ теста в нашей модификации.

Контроль серий M.s. и W.s. показал: 1) соответствие культурально-морфологических признаков паспортным данным; 2) безопасность; 3) содержание белка в биомассе 40,7 и 41,3 % для M.s. и W.s. соответственно; 4) продуктивность - 14,1 и 13,8 г мицелия/1 л КЖ. При контроле КЖ установлено: 1) безопасность; 2) высокое содержание органических кислот - 10,1 г/л (лимонной - 0,7 г/л, яблочной - 0,5 г/л, фумаровой - 0,4 г/л, янтарной - 0,4 г/л, щавелево-уксусной - 0,6 г/л, уксусной - 0,8 г/л); 3) содержание сухих веществ 2,5 -3,1%; 4) рН в пределах 6,6-7,0.

3.2.4. Посевной материал дрожжей S. cerevisiae для кормовой белковой добавки ЦЕРЕВЕТ. M.s. - 2-й пассаж коллекционного штамма, W.s. - 3-й пассаж M.S. На базе ФГУП ГосНииСинтезбелок готовый посевной материал (M.s. и W.s.) контролировали: 1) по химическому составу (содержание в сухом продукте сырого протеина, истинного белка, липидов, углеводов, золы); 2) на подлинность (культурально-морфологические признаки) и содержание дрожжевых клеток (микроскопированием и посевом на плотную питательную среду); 3) безопасность (отсутствие посторонней микрофлоры, безвредность для цыплят суточного возраста, отсутствие эмбриотоксичности и токсичности для тест-культур инфузорий тетрахимена пириформис и стилонихий). Результаты контроля серий M.s. и W.s. показали: подлинность; безопасность; содержание дрожжевых клеток 5,0х106 и 4,8х106 в 1 г для M.s. и W.s соответственно; соответствие химического состава характеристикам, определенным для коллекционного штамма (массовая доля сырого протеина – не менее 38%, истинного белка – не менее 28% , липидов – не более 10%, углеводов – не более 28%, золы – не более 12%).

Разработанная и реализованная система изготовления и контроля посевных материалов обеспечивала их соответствие исходным штаммам и гарантировала получение конечного продукта с заданными свойствами. На процедуры изготовления и контроля посевных материалов разработаны и утверждены директором ВНИТИБП соответствующие стандарты организации (СТО).

3.3. Технология производства и доклинические исследования препаратов (пробиотиков АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, пребиотика АВИСТИМ и белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ), изготовление опытных серий.

3.3.1. Разработка технологии производства препаратов.

Процесс изготовления препаратов является типовым для микробиологических производств и подчиняется общей технологической схеме, состоящей из основных технологических процессов (ТП), подготовительных (ПР) и вспомогательных (ВР) работ. ПР включали подготовку воздуха, помещений, оборудования, одежды, посуды, инструментов, материалов первичной упаковки, укупоривания и этикетирования. ВР - получение производственного посевного материала (P.s.), приготовление питательных сред, вспомогательных растворов. ТП состояли из этапов приготовления питательной среды и культивирования бактерий в реакторе, фасования, сублимационного высушивания (при получении сухой формы), укупоривания и этикетирования препарата. Качество препаратов в процессе производства обеспечивали системой технологического контроля. Для разработки схемы контроля устанавливали контрольные точки (КТ), определяемые в этих точках показатели, их допустимые пределы и методы определения. Качество готового продукта контролировали по показателям, определенным нами при изготовлении посевных серий. Определены требования к качеству исходных материалов и промежуточных продуктов, безопасности производства и охране окружающей среды.


загрузка...