ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЕ КРИТЕРИИ ПРИ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАЛЛЕЛЯХ ПРОГНОЗА РАКА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (25.09.2012)

Автор: Бессмертный Дмитрий Васильевич

Научно-практическая значимость работы

Выявлен профиль заболеваемости РПЖ в Белгородской области. В работе определены иммуногистохимические маркеры (антитела моноклональные кроличьи к человеческим AMACR (Р504S), клон 13Н4, FLEXRTU, антитела моноклональные мышиные к человеческим, цитокератин, клон 34ssЕ12, FLEXRTU, антитела поликлональные кроличьи к человеческим, простат-специфический антиген, FLEX RTU, антитела моноклональные мышиные к человеческим р63 протеин, клон 4А4, антитела моноклональные мышиные к человеческим Ki67 антиген, клонMIB-1, FLEXRTU), позволяющие внести новые диагностические критерии РПЖ. Сопоставление электронномикроскопических и иммуногистохимичеких данных позволило на основе первых оценить степень злокачественности опухоли и ход ее прогрессии. Макро- и микроэлементный анализ позволил показать увеличение содержания кислорода в паренхиме опухолевого узла, а также увеличение содержания магния и натрия, фосфора, прогрессивно снижающееся в отдалении от опухолевых клеток. Изучение качества жизни позволяет обосновать тактику проводимых методов лечения (гормональная терапия, лучевая терапия, хирургические методы лечения).

Апробация диссертации

Материалы диссертации доложены на Всероссийской конференции с международным участием (Санкт-Петербург, 2009), на 4 Геронтологических чтениях (Белгород, 2010). Апробация диссертации состоялась 5 октября 2011 года на расширенном заседании кафедр: патологии, хирургических болезней №1 и общей хирургии с курсом оперативной хирургии и топографической анатомии медицинского факультета Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Белгородский государственный университет».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 5 работ в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики клинического материала и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 238 источников, из них 131 отечественных и 107 зарубежных. Работа содержит 24 таблицы и 17 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Характеристика клинического материала и методов исследования

Данные о структуре заболеваемости онкопатологией РПЖ взяты из архивов, амбулаторных карт, историй болезни и онкорегистра ОБГУЗ Белгородского онкологического диспансера (БОД) с 1999 по 2010 г. Для изучения архивного материала использовалась специальная однотипная выборка данных, которая отражала разделы анамнеза, клинического и диагностического обследования, результаты различных видов медицинской помощи. На каждого пациента была заполнена специально разработанная карта «Карта обследования больного раком предстательной железы».

Проведено изучение 134 больных РПЖ при различных методах лечения. В зависимости от проведенных методов лечения всех больных раком предстательной железы разделили на следующие группы: 1) получавшие только гормональное лечение; 2) получавшие гормональное лечение совместно с лучевым лечением; 3) получавшие комплексное лечение совместно с ТУР простаты; 4) подвергшиеся радикальной простатэктомии.

Из 134 больных с РПЖ наблюдались преимущественно в возрасте от 61 года до 80 (48%) лет (табл. 1). Средний возраст больных 67.2г. Возраст 5 больных был менее 50 лет (3,7%).

Таблица 1

Распределение больных в группах по методам лечения в зависимости от возраста (n/%)

Возраст

Метод

лечения Кастрация+/-гормонотерапия Кастрация+луче-вая терапия Кастрация+лучевая терапия+ТУР Радикальная простатэк-томия Всего

Менее 50

2/6% 3/13% 5/4%

51–60 4/9% 10/29% 8/26% 7/30% 29/22%

61–70 24/53% 14/40% 12/39% 8/35% 58/43%

71–80 12/27% 8/23% 8/26% 5/22% 33/25%

Старше 80 5/11% 3/8% 1/3%

Итого 45/100% 35/100% 31/100% 23/100% 134/100%

Преимущественно это были больные с III стадией (62 человека). Затем последовательно следовали: IV (33), II (37), I (2). Больные с IV стадией имели преимущественно (80%) метастазы в костную ткань, в 20% в лимфатические узлы, и лишь в 5% были метастазы в печень, легкие и другие органы (табл.1).

У всех (n=134) больных РПЖ проведено изучение изменения качества жизни при различных методах лечения. Качество жизни оценивалось по стандартному вопроснику EORTC QLQ-C 30. Вопросник состоит из 30 вопросов. Первые 28 вопросов касаются различных аспектов жизни больного. Это вопросы, касающиеся повседневной физической активности больных, их социальной и трудовой адаптации, вопросы, связанные с психическим здоровьем больного, отдельными часто встречающимися жалобами и другие. Ответ оценивается по 4-балльной системе (1– нет, 4 – очень сильно). В последних двух вопросах больной оценивает свое качество жизни в целом (1 – очень плохое качество жизни и здоровья, 7 – отличное).

Производилась оценка качества мочеиспускания по Международной системе суммарной оценки заболеваний простаты в баллах (IPSS). В данной системе больному предлагается ответить на 7 вопросов, касающихся различных нарушений мочеиспускания. Ответы оцениваются по 5-балльной системе (0 – нет, 5 – почти всегда). В последнем 8 вопросе больному предлагается оценить свое качество мочеиспускания в целом (0 – очень хорошее, 6 – очень плохое). Вследствие этого ответ по данному вопроснику выглядит как сумма двух чисел.

Отдельно выделена группа с радикальной простатэктомией (23 случая). В этой группе проводилась комплексная морфологическая диагностика. Всем больным перед простатэктомией выполнялась мультифокальная биопсия предстательной железы под УЗИ контролем. 18 больным биопсия бралась из 12 точек, 3 больным – из 8 точек, 2 больным из 18 точек.

Изучение выполнено по схеме, которая включала макроскопический анализ, вырезку материала, гистологическое изучение. Для гистологического исследования из операционного материала вырезали кусочки, которые маркировали и затем фиксировали в 10%-ном растворе формалина, забуфференном по Лилли при рН-7,4, затем заливали в парафин по обычной методике. Серийные срезы толщиной 3-5 мкм депарафинировали по стандартной схеме, затем окрашивали гематоксилином и эозином. Образцы просматривали и фотографировали в световом микроскопе «TOPIC-T» CETI (Нидерданды).

Для иммуногистохимических исследований материал фиксировали в 10%-ном забуференном формалине, заливали в парафин, готовили серийные срезы толщиной 4-5 мкм. Срезы депарафинировали по стандартной схеме. Иммуногистохимическое исследование проведено с применением антител фирмы «Дако» (Дания). Использованы следующие маркеры: антитела моноклональные кроличьи к человеческим AMACR (Р504S), клон 13Н4, FLEXRTU, антитела мноклональные мышиные к человеческим, цитокератин, клон 34ssЕ12, FLEXRTU, антитела поликлональные кроличьи к человеческим, простат-специфический антиген. FLEX RTU, антитела моноклональные мышиные к человеческим р63, протеин, клон 4А4, антитела моноклональные мышиные к человеческим Ki67 антиген, клон MIB-1, FLEXRTU.

Для сканирующей электронной микроскопии изучаемые кусочки помещали в фиксирующую смесь (37оС) из 2% глутаральдегида на 0,15 М фосфатном буфере с pH 7,2–7,4. В фиксирующей смеси пробы держали в холодильнике (от 2 суток до 1 месяца). Затем пробы просматривали под растровым микроскопом FE1 Quanta 200 3D (Нидерланды-Чехия). Определяли следующие макро- и микроэлементы; углерод, кислород, калий, кальций, натрий, магний, фосфор, серу, железо, азот. Нами было изучено распределение микроэлементов на поверхности образца, полученного путем операционной биопсии при удалении опухолевого узла.

Данный метод позволяет получить график пространственного распределения химических элементов по поверхности образца, а также отобрать диагностически важные микроэлементы. При этом с образца, предварительно фиксированного раствором глутаральдегида, в криостате были сделаны срезы 4-5 мм толщиной. Полученные срезы помещали в камеру растрового электронного микроскопа. По умолчанию исследования образцов проводились в режиме HichVac. В случаях, когда это не удавалось (образец быстро заряжался под действием электронного пучка), исследования проводились в режиме LowVac, а затем осуществлялся перерасчет результатов количественного элементного анализа. Суть метода заключается в том, что на поверхность выбранной зоны исследования наносилась координатная сетка, а затем проводился элементный анализ в заранее заданных точках. Таким образом, выявлено достаточно информации об элементном составе образцов для того, чтобы построить графики пространственного распределения микроэлементов.

Для зондовой сканирующей микроскопии после предварительного просмотра срезов в световой микроскоп выбирали необходимые парафиновые блоки. После целевого просмотра проводили съемку и морфометрический анализ. Зондовая сканирующая микроскопия проведена на сканирующем зондовом микроскопе «Ntegra-Aura». Исследования проводили в режимах постоянного или прерывистого контакта на приборе «Ntegra-Aura» (Компания НТ-МДТ, г. Зеленоград, Россия) с использованием коммерческих Si или SiN кантилеверов (NSG01, NT-MDT, Россия) в условиях атмосферы и низкого вакуума. В качестве подложек использовали слюду (мусковит) или высокоориентированный пиролитический графит (пирографит) для исследования поверхности свежего скола. Обработку и построение АСМ-изображений проводили при помощи программного обеспечения «NOVA» (НТ-МДТ, Россия) и «ImageAnalysis» (НТ-МДТ, Россия). Использовалась программа построения линий уровня OriginPro 6.1.

????????¤????&??????]?И

Мани-Уитни. Статистически значимым считались различия при p<0,05.

Результаты исследования

Проведенный анализ показал, что заболеваемость в Белгородской области за последние 10 лет прогрессивно увеличивается, составляя при этом в 1999 г. 14,3 на 100 тысяч населения, а в 2010 – 43,2. Смертность также имеет тенденцию к росту (с 6,3 до 15,8 на 100 тысяч населения). Пятилетняя выживаемость возросла с 20,7 до 23,9 на 100 тысяч населения. Индекс накопления возрос с 2,0 до 3,2. Следовательно, происходит непрерывный рост заболеваемости РПЖ.

В нашем исследовании гормонотерапия и лучевая терапия, трансуретральная резекция были проведены больным с II–IV стадиями. Радикальная простатэктомия выполнена соответственно: в I стадии – 2 больным, во II стадии – 13 больным, в III стадии – 6 больным, в IV стадии – 2 больным.

Показано, что в группе «гормональная терапия» было наибольшее число больных с III и IV стадиями болезни, в группе «радикальная простатэктомия» преобладали больные с I и II стадиями болезни. Выявлено, что наибольшее число больных было с умеренно дифференцированной аденокарциномой (табл. 2).


загрузка...