РАЗРАБОТКА ОРИГИНАЛЬНОГО АНКСИОЛИТИКА С АНТИАЛКОГОЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ НА ОСНОВЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ХОЛЕЦИСТОКИНИНА (24.09.2012)

Автор: Колик Лариса Геннадьевна

Таким образом, в спектре психотропной активности изучаемого дипептидного аналога ХЦК установлены анксиоселективные эффекты, не сопряженные с психостимулирующим и седативным действием.

Рис.3. Влияние ГБ-115 на поведение крыс MR и MNRA в тесте «конфликтная ситуация» (сила тока 0,5 мА). Данные представлены как M+SEM; **-p<0,01, ***-p<0,01 статистически значимые различия относительно группы контроля согласно t-критерию Стьюдента, в каждой группе 10-15 животных. В качестве препаратов сравнения использованы диазепам в дозе 4.0 мг/кг, в/б, и афобазол в дозе 1,0 мг/кг, в/б.

Для анализа механизма анксиолитического действия ГБ-115 в связи с выявленными рецепторными мишенями изучено его влияние на поведение инбредных мышей и беспородных крыс в опытах in vivo с использованием фармакологических анализаторов: при совместном введении с агонистом ХЦК-рецепторов ХЦК-4 (4,0 мкг/кг, в/б), неселективным антагонистом опиоидных рецепторов налоксоном (1,0 мг/кг, в/б) и агонистом бомбезиновых рецепторов - фрагментом бомбезина 8-14 (0,015 мг/кг, в/б).

Установлено, что предварительное введение ХЦК-4 препятствует проявлению «противотревожной» активности дипептида ГБ-115 (0,025 мг/кг, в/б) у мышей BALB/с в тесте ОП (рис.4).

У беспородных крыс ХЦК-4 значительно сокращает время нахождения (p<0,05) и число заходов в открытые рукава (p<0,01) ПКЛ, что свидетельствует о вызываемой этим веществом тревожной реакции. При последующем введении ГБ-115 (0,05 мг/кг, в/б) препятствовал развитию анксиогенеза, сохраняя поведенческие показатели животных в ПКЛ на уровне контрольных значений. Таким образом, установлен функциональный антагонизм ГБ-115 и ХЦК-4 (рис.4).

В опытах с налоксоном анксиолитический эффект ГБ-115 в ПКЛ сохранялся, что позволяют предположить отсутствие прямой связи опиоидергической системы с анксиолитическим действием препарата (рис.5).

Рис.4. Влияние ХЦК-4 и ГБ-115 на общую двигательную активность инбредных мышей линий BALB/c и C57Bl/6 в тесте «открытое поле». Данные представлены как М±SEM; **-p<0,01 статистически достоверные различия по сравнению с контрольной группой, ANOVA, тест Даннетта; число животных в каждой группе 9-11.

Активация бомбезиновых рецепторов вызывает анксиолизис, увеличивая время пребывания в открытых рукавах ПКЛ в 3,2 раза. ГБ-115 также увеличивает время нахождения на открытых площадках ПКЛ в 3,5 раза (рис.6). На фоне предварительной стимуляции бомбезиновых рецепторов действие ГБ-115 в отношении основного показателя поведенческой активности в данном тесте возрастает вдвое, что свидетельствует о суммации фармакологического эффекта.

Рис.5. Влияние ГБ-115 115 на поведение беспородных крыс в тесте ПКЛ на фоне блокады опиоидных рецепторов налоксоном. Данные представлены как M+SEM; *-p<0,05, **-p<0,01 статистически достоверные различия по сравнению с контролем, согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни.

Таким образом, совокупность представленных результатов, демонстрирующих, отсутствие влияния неселективной блокады опиоидных рецепторов на эффекты ГБ-115, усиление анксиолитической активности ГБ-115 при предварительной активации бомбезиновых рецепторов, а также выявленный функциональный антагонизм между ХЦК-4 и ГБ-115, свидетельствуют о функциональной зависимости анксиолитических эффектов дипептида от ХЦК-рецепторов.

Рис.6. Влияние неселективной активации бомбезиновых рецепторов гептапептидным фрагментом бомбезина8-14 на анксиолитическое действие ГБ-115 в ПКЛ у мышей линии BALB/c. Данные представлены как М±SEM; *, **, -p<0,05, p<0,01 статистически достоверные различия по сравнению с группой «контроль», #, ## -p<0,05, p<0,01 по сравнению с группой «ГБ-115», согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни; число животных в каждой группе по 8-9.

Изучение антиалкогольной активности соединения ГБ-115

Значительным ограничением использования бензодиазепинов в фармакотерапии алкогольных расстройств является их способность потенцировать эффекты этанола. С другой стороны, многочисленные данные литературы свидетельствуют о непосредственной вовлеченности ХЦК в механизмы этаноловой зависимости, а антагонисты ХЦК-рецепторов рассматриваются в качестве потенциальных средств для коррекции вызываемых алкоголем расстройств (Gaviraghi, et al., 1994; Crespi, et al., 1997). Поэтому соединение ГБ-115 было изучено на экспериментальных моделях алкогольной зависимости.

Согласно результатам экспериментов, ГБ-115 в диапазоне анксиолитических доз 0,0125 – 0,05 мг/кг, в/б, не потенцирует наркотическое действие этанола (рис.7А). Феназепам в дозе 1,0 мг/кг, в/б,) увеличивает (p<0,01) продолжительность алкогольного наркоза по сравнению с контрольной группой (рис.7Б). Таким образом, полученные данные свидетельствуют о преимуществе ГБ-115 перед бензодиазепиновым транквилизатором по критерию отсутствия потенцирования действия этанола, что позволяет использовать ГБ-115 в дальнейших исследованиях по изучению влияния препарата на эффекты алкоголя.

Ранее было показано отсутствие влияния соединения ГБ-101, одного из N-феналканоилзамещенных дипептидов (таблица 1) на среднесуточное потребление 15% раствора этанола на всех трех стадиях экспериментального алкоголизма (через 10 дней, через 6 и 12 месяцев) (Колик Л.Г., 2002), поэтому в настоящей работе влияние ГБ-115 на алкогольное поведение животных изучали на 3-м этапе экспериментального алкоголизма после 8-ми месяцев добровольного потребления алкоголя в условиях свободного выбора между этанолом и водой, то есть во время сформировавшейся физической зависимости, у MR и MNRA крыс и изначально различавшихся по фенотипу эмоционально-стрессовой реакции в тесте «открытое поле» беспородных крысах.

А. Б.

Рис.7. Влияние ГБ-115 на продолжительность этанолового наркоза (А) у инбредных мышей линий BALB/c и C57Bl/6; (Б) у беспородных мышей. Данные представлены как M±SEM; # -p<0,05 статистически достоверные различия по сравнению с контрольной группой мышей линии BALB/c; **-p<0,01 статистически значимые отличия по сравнению с группой «контроль»; ANOVA, тест Даннетта; число животных в каждой группе по 10-12.

Установлено, что ГБ-115 в дозе 0,025 мг/кг/день, в/б, 14 дней, снижает среднесуточное потребление этанола (р<0,05) и существенно ослабляет влечение к алкоголю по показателю алкоголь-депривационного эффекта (АДЭ) (р<0,01) у крыс MR. У крыс MNRA аналогичного эффекта не обнаружено (рис.8А, 8Б).

Рис.8. Влияние ГБ-115 на алкогольную мотивацию у крыс MR/MNRA после 12-ти месяцев добровольного потребления 15% раствора этанола.

????????o

????i?"?????µ

????l??~?b

????i?|

????l??~?К

????l??~?B

????l??~?љ

????i?р

????l??~?ц

?????"??????

Данные представлены в виде средних значений; *-p<0,05,**-p<0,01 по сравнению с фоном, критерий Вилкоксона для зависимых групп; в каждой группе по 7-9 животных.

При изучении влияния ГБ-115 при однократном введении на поведение беспородных крыс в период отмены этанола в тесте ПКЛ установлено, что ГБ-115 в дозах 0,0125 и 0,025 мг/кг, в/б, увеличивает время нахождения животных в открытых рукавах лабиринта; ГБ-115 в дозе 0,025 мг/кг увеличивает отношение числа заходов в открытые рукава к общему числу заходов в рукава лабиринта (%); ни в одной из изученных доз ГБ-115 не влияет на двигательную активность (рис.9А и 9Б).

Рис.9. Влияние ГБ-115 на поведение беспородных крыс в ПКЛ в условиях «отмены» этанола. Данные представлены в виде средних значений; *, ** - p<0,05, p<0,01 статистически достоверные отличия по сравнению с контрольной группой, ANOVA, тест Даннетта; в каждой группе по 6-8 животных.

Установлено, что ГБ-115 в дозе 0,2 мг/кг, п/о, купирует (p<0,05) анксиогенную реакцию, индуцированную отменой этанола, как у изначально «пассивных», так и «активных» в стрессовой ситуации теста ОП животных со сформировавшейся в течение 15-ти месяцев алкогольной мотивацией. Полученные данные свидетельствуют о том, что ГБ-115 способен устранять анксиогенез, вызываемый отменой этанола, не уступая в этом отношении диазепаму.

Изучение антиноцицептивной активности ГБ-115

Исходя из результатов радиорецепторного анализа, выявившего КОР в качестве одной из первичных мишеней действия ГБ-115, в настоящем разделе исследовали антиноцицептивные свойства ГБ-115 при стимуляции ноцицепторов раздражителями различной модальности на спинальном, супраспинальном уровнях, а также на периферии.

При оценке эффектов ГБ-115 при химической стимуляции ноцицепторов 0,75% раствором уксусной кислоты, в/б, в тесте «корчи» установлено, что соединение ГБ-115 в диапазоне доз 0,1-20,0 мг/кг обладает выраженной анальгетической активностью (рис.10А).

Рис.10. Антиноцицептивные свойства ГБ-115 при химической стимуляции (А) в тесте «уксусные корчи», при термической стимуляции в тесте (В) «горячая пластинка» и (С) «отдергивание хвоста». Данные представлены в виде M±SEM; статистически достоверные различия по сравнению с контрольной группой показаны при *-p<0,05, ** -p<0,01, ***-p<0,001 согласно непараметрическому критерию Манна-Уитни; МВЭ (максимально возможный эффект) = (латентный период реакции после введения соединения минус фоновый латентный период реакции)/(максимальное время экспозиции минус фоновый латентный период реакции) Х 100%; количество животных в группе по 9-14.

Развитие эффекта ГБ-115 отмечалось с увеличением дозы, достигая при введении препарата из расчета 10,0 мг/кг максимального угнетения реакций на 76,3% по сравнению с контролем (p<0,0001). Последующее увеличение дозы дипептида до 20,0 мг/кг приводит к ослаблению анальгезии до 43,9% (р<0,05). При сопоставлении эффекта ГБ-115 с опиоидными и неопиоидными анальгетиками показано, что ГБ-115 в максимально эффективной дозе 10,0 мг/кг уступает по силе морфину (5,0 мг/кг, в/б), уменьшавшему ноцицептивную реакцию на 95,5% (p<0,001), но сопоставим с анальгетической активностью нестероидного противовоспалительного средства диклофенака (20,0 мг/кг, п/о).

В ответ на термическую стимуляцию в тесте «горячая пластинка» («hot plate») ГБ-115 статистически значимо ослабляет ноцицептивную реакцию только в максимально изученной дозе 20,0 мг/кг (рис.10В), значительно уступая по силе действия морфину.

ГБ-115 с возрастанием дозы постепенно увеличивает латентный период реакции в тесте «отдергивание хвоста» (до 281,2% при дозе 10,0 мг/кг), при этом также уступает морфину (до 443,7%), по сравнению с контролем (рис.10С). При увеличении дозы до 20,0 мг/кг соединение ГБ-115 не проявляет антиноцицептивного эффекта в данном тесте.


загрузка...