Исследование по применению электрофореза на бумаге и капиллярного электрофореза при анализе азотсодержащих соединений основного характера в биологических объектах (24.09.2012)

Автор: Фомин Анатолий Николаевич

2. Уксусная кислота, pH 2,0 9,42±0,06 4 4

3. Трихлоруксусная кислота, pH 1,0 9,26±0,06 4 4

4. Ацетон 9,28±0,07 4 4

Лидокаин, модельная смесь (30 мкг/проба)

1. Щавелевая кислота, pH 2,0 6,62±0,14 2 2

2. Уксусная кислота, pH 2,0 6,60±0,14 2 2

3. Трихлоруксусная кислота, pH 1,0 6,50±0,14 2 2

4. Ацетон 6,26±0,15 2 2

Азалептин, модельная смесь (30 мкг/проба)

1. Щавелевая кислота, pH 2,0 10,35±0,15 4 4

2. Уксусная кислота, pH 2,0 10,36±0,15 4 4

3. Трихлоруксусная кислота, pH 1,0 10,32±0,15 4 4

4. Ацетон 10,30±0,16 4 4

ЭФС-идентификация доксициклина (представителя амфотерных АССОХ) в составе МБС мочи, крови методом электрофореза на бумаге

С целью изучения влияния соэкстрактивных веществ биологических жидкостей на ЭФС-идентификацию амфотерного соединения (доксициклина), готовили МБС, используя щелочные (рН 7,0) хлороформные извлечения образцов мочи и крови.

Электрофорез МБС проводили в приборе «ПВЭФ-1» в присутствии индикатора электроосмоса и реофореза – 1,3,5-тринитробензола (ТНБ) в условиях: носитель – хроматографическая бумага марки «С»; напряжение – 400 В; время – 1,5 ч; электролит – буферный раствор Бриттона-Робинсона, в диапазоне рН 1,8 – 10,0; детектор доксициклина – УФ свет при 365 нм, ТНБ – пары аммиака.

На ЭФГ рассчитывали:

- наблюдаемые электрофоретические подвижности исследуемого вещества и ТНБ в абсолютных величинах (ДПФсм);

- исправленную электрофоретическую подвижность антибиотика (Исм) на электросмос и реофорез по формуле:

Исм = ДПФсм антибиотика – ДПФсм ТНБ

Значения Исм использовали для построения ЭФС Исм доксициклина в составе МБС (мочи, крови) и доксициклина-стандарта.

Полученные результаты исследований показали:

- конфигурации ЭФС по Исм доксициклина-стандарта и доксициклина в составе МБС (моча, кровь) аналогичны (рис. 6 и 7);

- количественные характеристики ЭФС по Исм позволяют идентифицировать доксициклин в присутствии биокомпонентов мочи и крови. При этом величины рКа и Рi исследуемого соединения, полученные в составе МБС (моча, кровь), совпадают с соответствующими величинами доксициклина-стандарта (табл. 8).

Рисунок 6 - ЭФСИ см по Исм доксициклина гидрохлорида (1),

доксициклина в составе модельной смеси – мочи

Рисунок 7 - ЭФСИ см по Исм доксициклина гидрохлорида (1),

доксициклина в составе модельной смеси - крови

Таблица 8 - Идентификация доксициклина в биологической жидкости по ЭФСи см (количественные характеристики)

pKa1=3,4

pKa2=7,4

pKa3=9,5 3,5±0,12 pKa1=3,5

pKa2=7,4

pKa3=9,5 3,5±0,12 pKa1=3,4

pKa2=7,4

pKa3=9,5 3,6±0,12

Примечание: Количественные характеристики рассчитаны на ЭФС по И см с использованием средних выборок результатов 3-х параллельных электрофоретических исследований антибиотика при соответствующих величинах рН электролита

Применение электрофореза на бумаге для ЭФС-идентификации тримекаина и мезидина в жидких средах и внутренних органах экспериментальных животных

Нами изучена возможность применения электрофореза на бумаге для ЭФС-идентификации тримекаина и его метаболита - мезидина в жидких средах и внутренних органов экспериментальных животных (кроликов).

Электрофорез солянокислых остатков проводили в соответствии с разработанной нами методикой ЭФС-идентификации АССОХ на этапе электрофореза-скрининга (прибор – «ПВЭФ-1», 400 В, 1ч; носитель – хроматографическая бумага марки «FN-15»; электролит – буферный раствор Бриттона-Робинсона в диапазоне рН 1,8 – 10,0; детектор – реактив Драгендорфа, модифицированного по Мунье).


загрузка...