Исследование по применению электрофореза на бумаге и капиллярного электрофореза при анализе азотсодержащих соединений основного характера в биологических объектах (24.09.2012)

Автор: Фомин Анатолий Николаевич

Средние арифметические значения ДПФсм исследуемых оснований в пяти повторностях, при соответствующих значениях рН электролита, использовали для построения ЭФС. Результаты исследований свидетельствуют о том, что ЭФС по ДПФсм тримекаина и его метаболита - мезидина индивидуальны, при этом, профили ЭФС по ДПФсм тримекаина гидрохлорида и его основания, выделенного из печени, крови и места введения кролика, совпадают (рис. 8).

В свою очередь профили ЭФС по ДПФсм мезидина гидрохлорида и его основания, выделенного из желудка и крови кролика, также совпадают (рис.9).

Таким образом, опыты с введением тримекаина и мезидина экспериментальным животным показали, что способ установления ЭФС по ДПФсм может быть использован для идентификации исследуемых веществ, выделенных из жидких сред и внутренних органов животных (рис. 12, 13).

Рисунок 8 - ЭФС по ДПФсм тримекаина гидрохлорида (1) и его снования, выделенного из печени (2), крови (3) и места введения (4) кролика

Рисунок 9 - ЭФС по ДПФ см мезидина гидрохлорида (1) и его основания, выделенного из желудка (2) и крови (3) кролика

Идентификация ряда АССОХ в присутствии соэкстрактивных веществ мочи и крови методом капиллярного электрофореза

?F??????

? данные по применению электрофоретических спектров (ЭФС) для идентификации лекарственных веществ в биологических объектах методом капиллярного электрофореза.

На общее наблюдаемое время миграции (tм) иона может оказывать существенное влияние ряд факторов: время миграции ЭОП, рН электролита, присутствие в пробе соэкстрактивных веществ биосубстратов.

Нами изучена возможность ЭФС-идентификации ряда АССОХ (бупивакаина, лидокаина, азалептина) методом капиллярного электрофореза в присутствии соэкстрактивных веществ биологических объектов в составе МБС мочи и крови.

Приготовление МБС осуществляли, путем двухкратной экстракции аликвоты мочи и крови хлороформом (в соотношении 1:1) из щелочной среды (рН 10,0), с последующим реэкстрагированием буферным раствором Бриттона-Робинсона, рН 2,3, разбавленным водой в 10 раз (в соотношении с хлороформом 1:1). К полученным реэкстрактам добавляли стандартные образцы АССОХ и маркер ЭОП – бензиловый спирт (БС), с концентрацией исследуемых компонентов в пробе - 10 мкг/мл. Электрофоретическое исследование реэкстрактов проводили на приборе «Капель-105», в разработанных выше условиях. Детектирование осуществляли в УФ-области спектра: 200 нм (бупивакаин, лидокаин), 245 нм (азалептин).

На ЭФГ рассчитывали исправленное время миграции исследуемых соединений по БС на ЭОП (tи) и использовали для построения ЭФС, с помощью которых рассчитывали константы ионизации (рКа) АССОХ.

Результаты исследований показали, что профили ЭФС по tи исследуемых АССОХ, их количественные характеристики (рКа1,2) в присутствии соэкстрактивных веществ практически совпадают с соответствующими профилями и характеристиками ЭФС АССОХ-стандартов (рис. 10-12, табл. 9).

pKa1=4,4 pKa2=7,7

pKa1=4,3 pKa2=7,6

pKa1=4,5 pKa2=7,8

Рисунок 10 - ЭФС по tи лидокаина – стандарта (А), и лидокаина в присутствии соэкстрактивных веществ мочи (Б) и крови (В)

Рисунок 11 - ЭФС по tи бупивакаина – стандарта (А), и бупивакаина в присутствии соэкстрактивных веществ мочи (Б) и крови (В)

Рисунок 12 - ЭФС по tи азалептина – стандарта (А), и азалептина в присутствии соэкстрактивных веществ мочи (Б) и крови (В)

Таблица 9 - Количественные характеристики ЭФС по tи см АССОХ – стандартов и АССОХ в присутствии соэкстрактивных веществ мочи и крови

п/п АССОХ ЭФС по tи (стандарт) ЭФС по tи

Моча Кровь

1. Бупивакаин pKa1= 4,50

pKa2= 8,10 pKa1= 4,50

pKa2= 8,05 pKa1= 4,50

pKa2= 8,05

2. Лидокаин pKa1= 4,40

pKa2= 7,70 pKa1= 4,30

pKa2= 7,60 pKa1= 4,50

pKa2= 7,80

3. Азалептин pKa1= 4,30

pKa2= 7,60 pKa1= 4,30

pKa2= 7,70 pKa1= 4,30

pKa2= 7,60

Примечание: Количественные характеристики рассчитаны на ЭФС по tи с использованием средних выборок результатов 5 параллельных электрофоретических исследований каждого из АССОХ при соответствующих величинах рН РЭ

Таким образом, разработана методика ЭФС-идентификации ряда АССОХ (лидокаина, бупивакаина, азалептина) в составе МБС мочи, крови с использованием системы капиллярного электрофореза («Капель-105») и установлено, что на количественные характеристики ЭФС по tи АССОХ не оказывают существенное влияние соэкстрактивные компоненты мочи и крови.

5. Количественное определение АССОХ в биологических объектах методами электрофореза на бумаге и капиллярным электрофорезом

Для определения микроколичеств веществ в биологических субстратах наиболее целесообразно использование методов, позволяющих сочетать очистку, обнаружение, идентификацию и количественное определение искомых веществ. Такими возможностями обладают электромиграционные методы (электрофорез на бумаге, капиллярный электрофорез).

Определение доксициклина методом электрофореза на бумаге

Предложена экспрессная методика планиметрического определения доксициклина на ЭФГ, позволяющая проводить предварительную оценку содержания исследуемого соединения на этапе электрофореза-скрининга методом электрофореза на бумаге в приборе «ПВЭФ-1», в выбранных выше условиях. Электролит – буферный раствор Бриттона-Робинсона (рН 2,3).


загрузка...