КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЭРБИЕВОГО ЛАЗЕРА В ХИРУРГИЧЕСКОЙ СТОМАТОЛОГИИ (23.01.2012)

Автор: Тарасенко Игорь Владимирович

В то же время, имеющееся на 40 сутки более высокое содержание оФРФ-? в биоптатах костной ткани животных, которым проводили остеотомию излучением эрбиевого лазера наряду с повышенным уровнем ИФР-1 можно расценивать как процесс активного ангиогенеза, деления клеток, формирования белковой матрицы и минеральной фазы. Отсутствие отличий в содержании ТФР-1? во все сроки эксперимента между группами животных, по всей видимости, следует рассматривать как активное формирование межклеточного матрикса в ране. Количество остеокальцина и ЩФ в группе животных, дефект которым формировали излучением эрбиевого лазера в режиме «very short», на 1 и 5 сутки заживления раны было сопоставимо между группами. Через 10 суток в этой группе животных наблюдается достоверное (р<0,05) снижение содержания остеокальцина. На 20 и 40 сутки эксперимента количество остеокальцина и ЩФ не отличалось между группами животных.

Рис. 2. Микрофокусная рентгенограмма с 20-кратным увеличением изображения после создания дефекта нижней челюсти кролика: а - эрбиевым лазером; б- физиодиспенсером

В 8 (57%) случаях в этой группе была восстановлена трабекулярная структура костной ткани в области кортикального слоя, при отсутствии костной мозоли со дна дефекта. (Рис. 2а) При хирургическом вмешательстве с помощью физиодиспенсера в эти сроки в 3 (23%) случаях отсутствовало восстановление кортикального слоя кости, регенерация происходила со дна дефекта за счет образования всех трех видов костной мозоли – эндостальной, периостальной и интермедиарной (Рис. 2б). Через 120 суток определялось полное замещение дефекта костной тканью, а в группе животных, у которых остеотомию осуществляли физиодиспенером определялось восстановление костной ткани, но без полного формирования кортикального слоя.

Оценка регенерации мягких тканей у экспериментальных животных

У лабораторных животных заживление дефекта слизистой оболочки щеки после лазерного воздействия происходило быстрее. Гистологическая картина раневого дефекта сразу после операции скальпелем, характеризовалась отсутствием эпителия в области дефекта, умеренным отеком ткани слизистой оболочки и слабой инфильтрацией нейтрофильными лейкоцитами. Многослойный плоский эпителий на краю дефекта был резко истончен, часть его клеток подвергалась дистрофии и некрозу. В лазерных дефектах многослойный плоский эпителий над эпителием отсутствовал либо был некротизирован. Под эпителием имелись поверхностные участки лазерной коагуляции ткани, обусловленные тепловой денатурацией клеток и коллагеновых волокон, еще глубже имелись признаки дезорганизации коллагеновых и мышечных волокон, разрыхление ткани, полнокровие сосудов и очень слабой нейтрофильной инфильтрации. На 2–4 сутки в скальпельных дефектах у большей части животных поверхность дефекта еще не эпителизирована, покрыта фибринозным экссудатом, содержащим нейтрофильные лейкоциты. На краях дефекта отмечается регенерация эпителия виде роста недифференцированного пласта эпителиальных клеток, под которым формируется грануляционная ткань.

Рис. 3. Гистологическая картина через 15 суток после нанесения дефекта слизистой оболочки крыс:

а - скальпелем; б - эрбиевым лазером. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение Х200.

Остается выраженная нейтрофильно-макрофагальная инфильтрация, сильно выражены некротические и дистрофические изменения в мышечной ткани. В дефектах, сформированных лазером, в части случаев в середине дефекта имелся неэпителизированный участок, покрытый фибринозным экссудатом, а на краю дефекта наблюдались признаки регенерации эпителия. При этом на 4 сутки раневой дефект слизистой оболочке полностью эпителизирован, выстлан относительно дифференцированным новообразованным эпителием, разделенным на 4 слоя. Под эпителием располагалась слизистая оболочка, в которой грануляционная ткань, в основном, фиброзирована. Коллагеновые волокна и фибробласты расположены в основном параллельно поверхности. Во все сроки наблюдения регенерация в лазерных ранах проходит более активно. Через 15 суток эпителий ран, сформированных лазером, уже мало отличается от интактного эпителия по толщине и степени дифференцировки. Под эпителием располагается фиброзно-рубцовая ткань, состоящая из рыхлых коллагеновых пучков с умеренным количеством фибробластов и с минимальным содержанием лимфоцитов и макрофагов (Рис. 3 а). Все это свидетельствует о постепенной инволюции рубцовой ткани, которая уже мало отличается от интактной ткани слизистой оболочки. В дефектах, сформированных скальпелем, эпителий гипертрофирован по сравнению с интактным эпителием, но уже хорошо дифференцирован. Под эпителием еще сохраняется грануляционная ткань в стадии фиброзирования, однако там еще не закончилась трансформация в рубцово-фиброзную ткань (Рис. 3б). Об этом свидетельствует повышенное количество сосудов и фибробластов, а также остающаяся лимфо-макрофагальная инфильтрации.

Наши исследования показали, что в процессе регенерации в слизистой оболочке щеки при воздействии лазера на 1 сутки отмечалось повышение ИЛ-4 и ИЛ-10 и уменьшалось количество ТИМП-1 (табл.3). наибольшее количество ИЛ-4 определялось на 5 и 7 сутки. Количество ИЛ-6 достоверно возрастало на 2 сутки, а количество ИЛ-10 повышалось уже в первые сутки и оставалось высоким до конца эксперимента. Количество про ММП-1 существенно не менялось во все сроки, а содержание ТИМП-1 во все сроки уменьшалось и наибольшее уменьшение наблюдалось на 1, 3 и 5 сутки. Несколько иная картина наблюдалась при нанесении раны скальпелем. Так уже в 1 сутки имелась тенденция к повышению уровня ИЛ-1?, который сохранялся до 3 суток эксперимента. У этих животных резко возрастало содержание ИЛ-4, и оно несколько понижалось только к 7 суткам опыта. Количество ИЛ-10 в 1 сутки после нанесения раны было в 3,5 раза выше по сравнению с содержанием данного цитокина в регенерате, полученном у животных, оперируемых лазером. Оно оставалось высоким и на 2 сутки эксперимента, а потом снижалось. Количество проММП-1 в слизистой оболочке этой группы животных также существенно не отличалось от показателей контрольной группы животных, а количество ТИМП-1 хотя и снижалось, но это понижение было менее выражено по сравнению с животными, которых оперировали лазером.

Исследование содержания основного ФРФ-? в слизистой оболочке щеки крыс в процессе заживления раневого дефекта показало, что наибольшее его количество в случае нанесения раны лазером наблюдалось на 2 сутки (табл.4).

Таблица 3

Исследование показателей, отражающих заживление слизистой оболочки щеки крыс в динамике (М±m)

Показатели

(пг/мг ткани) Группы Сроки регенерации костной ткани

Контроль-

,24±0,008

Лазер

0,21±0,008 0,23±0,01 0,22±0,01 0,22±0,01 0,24±0,02

ТИМП-1 Скальпель 12,7±1,28 8,16±2,25 8,78±3,50 8,64±1,64 6,36±0,96 6,26±0,90

Лазер

5,52±0,80* 8,24±2,24 5,63±1,63* 6,26±0,79 8,64±1,00

*р<0,05 - достоверность отличий при сопоставлении 1 и 2 групп животных в динамике

Затем оно снижалось и приближалось к данным контрольной группы. В случае же нанесения раны скальпелем содержание этого фактора роста возрастало в 2 раза и оставалось высоким до 7 суток опыта. Такие изменения следует рассматривать как отражающие формирование грануляционной фиброзной ткани не характерной после воздействия лазерным излучением.

Таблица 4

Содержание основного фактора роста (нг/мг ткани) в слизистой оболочке щеки крыс в динамике заживления раневого дефекта (М±m)

Воздействие оФРФ-?

Эрбиевый лазер Скальпель

Дни опыта

1 49,5±9,63 124±2,07**

2 195±30,6** 89,1±4,82 *

3 90,1±3,43* 89,2±4,04*

5 65,1±3,96 85,3±6,35*

7 55,0±2,45 61,5±7,80

Контроль 51,3±4,74

Достоверность различий **р<0,001; *р<0,05 по отношению к контрольной группе

Проведение многофакторного корреляционного анализа между содержанием ИЛ-1? и ИЛ-6 с количеством проММП-1 и ТИМП-1 выявило, что имеется сильная статистически достоверная положительная линейная связь между содержанием ИЛ-1? и ТИМП-1 у животных, подвергнутых воздействию излучением эрбиевого лазера (R Spearmen =0,90; р=0,03). Подобные взаимоотношения прослеживаются и между содержанием ИЛ-6 и ТИМП-1 на 3 сутки опыта. У крыс, слизистую оболочку которых деэпителизировали скальпелем, соотношение ИЛ-6 и ТИМП-1 было статистически достоверным (R Spearmen=0,88; р=0,02) только через сутки, и это взаимоотношение прослеживается и в другие сутки заживления раны, однако корреляция слаба и не носит статистически достоверный характер.

Связь между содержанием оФРФ-? и ИЛ-1?, ИЛ-6 от 1 до 5 суток заживления раны слаба и недостоверна, а на 7 сутки имеется сильная положительная прямая достоверная связь между содержанием оФРФ-? и ИЛ-1? после воздействия излучением эрбиевого лазера (R Spearmen =0,90; р=0,03).

Исследование активности и содержания СОД выявило, что наибольшая её активность наблюдалась на 5 сутки у животных, оперированных скальпелем. В случае воздействия излучением эрбиевого лазера имелась лишь тенденция к увеличению этого фермента во все сроки эксперимента.

РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ

Рис. 4. Фото этапов лазерной лоскутной операци: а- внутрибороздковые разрезы; б - после исслечения патологических грануляций и снятия инфицированного цемента корней; в - через две недели после операции.


загрузка...