Бруцеллез животных в России: эпизоотологические особенности и совершенствование специфической профилактики (21.11.2011)

Автор: Искандаров Марат Идрисович

Наибольший бактерицидный эффект проявила популяция лимфоцитов от иммунизированных животных. Количество микробных клеток после инкубации уменьшилось более чем в половину. У интактных животных эти показатели остались практически на первоначальном уровне.

Бактерицидная активность сыворотки крови интактного животного оказалась выше, чем иммунного. Сыворотка крови иммунного животного не только не подавляла, но наоборот, стимулировала рост и размножение бруцелл.

Показаны более выраженные бактерицидные свойства крови от иммунизированного животного по сравнению с показателями крови от интактного животного.

В популяции полиморфноядерных лейкоцитов от интактных и иммунных животных количество бруцелл увеличилось в 4 и более раза. Вместе с тем при микроскопировании мазков, окрашенных по Романовскому-Гимза, фагоцитоз ярко выражен, особенно в иммунной популяции нейтрофилов. Некоторые нейтрофилы настолько переполнены бруцеллами, что создается угроза разрыва мембраны. Что и происходит, по-видимому, периодически, судя по некоторым разбросанным в разных полях зрения конгломератам бруцелл и ядерного вещества полиморфноядерных лейкоцитов без клеточной оболочки. Это совпадает с мнением П.А Вершиловой (1972) о том, что в процессе фагоцитоза при бруцеллезе нейтрофилы погибают.

2.6. Изучение аллергизации организма телок в зависимости от дозы вакцины и кратности ее введения

Определение гиперчувствительности замедленного типа является одним из диагностических тестов при бруцеллезной инфекции.

Гиперчувствительность замедленного типа у телок, иммунизированных против бруцеллеза, мы определяли путем пальпебрального введения бруцеллина ВИЭВ.

Установлено, что полная и малая дозы вакцины вызывают аллергическую перестройку организма вакцинированных телок. Выявлена некоторая зависимость аллергической перестройки от величины иммунизирующей дозы вакцины из штамма 19 B. abortus только после проведенной ревакцинации. После реиммунизации малой дозой на 50-ый день аллергические реакции отмечены у 20% телок, привитых первично малой дозой, и у 60% телок, привитых первично полной дозой вакцины из штамма 19 B. abortus.

При аллергическом исследовании ревакцинированных телок, мы не наблюдали связи между степенью аллергизации организма телок и устойчивостью к последующему заражению.

Наши опыты в производственных условиях показали, что аллергический метод диагностики позволяет отличить вакцинированных животных от больных бруцеллезом. При использовании для вакцинации и ревакцинации овец вакцины из штамма Rev-1 аллергическая реакция практически не появлялась, а если и появлялась, то очень скоро исчезала, тогда как у животных, хронически больных бруцеллезом, она сохранялась даже при выпадении серологических реакций. Следовательно, аллергическая реакция у животных является показателем хронического бруцеллеза.

2.7. Изучение расселения и приживаемости бруцелл вакцинного штамма B. abortus 19 в организме телок в зависимости от дозы вакцины

Расселение и приживаемость культуры бруцелл вакцинного штамма B. abortus 19 изучали в опыте на 12 телках 5-6 месячного возраста. Установили, что расселяемость и приживаемость бруцелл вакцинного штамма в организме животных, привитых разными дозами вакцины, протекала аналогично с некоторой разницей в первый месяц после иммунизации. Так, индекс инфицированности у телок, привитых малой дозой, через 1 месяц после вакцинации равнялся 60+2, а у телок, привитых полной дозой - 74+4. Через 2 месяца после вакцинации индекс инфицированности составлял соответственно 44+2 и 44+4.

Установлено, что в ранние сроки после вакцинации наиболее интенсивно были заселены бруцеллами вакцинного штамма регионарные лимфатические узлы (заглоточные и предлопаточные). Ко второму месяцу после вакцинации регионарные лимфатические узлы начали освобождаться от бруцелл, причем наиболее выражено у телок, привитых малой дозой. Через 2 месяца после прививки отмечено более интенсивное заселение отдаленных от места введения вакцины лимфатических узлов (пароаортальных, паховых и надвымянных), а также паренхиматозных органов.

Показано, что расселяемость и приживаемость бруцелл вакцинного штамма 19 B. abortus в организме телок незначительно зависит от дозы вакцины, что согласуется с данными, полученными нами в опыте на морских свинках. При введении малой дозы бруцеллы вакцинного штамма более интенсивно заселяли и быстрее освобождали регионарные лимфоузлы, по сравнению с результатами, полученными при введении полной дозы вакцины. Через 2 месяца после введения малой дозы вакцины бруцеллы более интенсивно заселяли отдаленные лимфоузлы. Это свидетельствует, о том, что на введение малой дозы вакцины иммунная система организма животных реагирует менее интенсивно, чем на полную дозу и позволяет интенсивно расселяться бруцеллам вакцинного штамма.

Таким образом, бактериологическими методами показана необоснованность применения полной дозы вакцины (80 млрд. м.к.), что уже было продемонстрировано при изучении клеточного и гуморального звена иммунитета.

2.7.2. Изучение эффективности конъюнктивального метода иммунизации

Целесообразность конъюнктивального метода иммунизации обусловлена тем, что проникновение бруцелл в организм животных происходит главным образом через слизистые оболочки.

Изучение динамики показателей гуморального иммунного ответа у телок, иммунизированных конъюнктивальным способом, показало незначительный подъем уровня антител и быстрое их угасание.

Для проверки иммунитета через 12 месяцев после ревакцинации подопытные и контрольные животные, имеющих 8-8,5 мес. стельность, были заражены вирулентной культурой B. abortus 54.

После заражения 60% животных контрольной группы абортировали, а нетели из опытных групп нормально отелились. В группе животных, реиммунизированных после первоначальной вакцинации полной дозой вакцины, все животные противостояли заражению. В другой группе, где животные дважды (в 3-5 месячном возрасте и через год после первичной прививки) иммунизированы конъюнктивально дозой 5 млрд.м.к. вакцины из штамма 19 B. abortus, 85,7 % противостояло искусственному заражению вирулентной культурой бруцелл.

Таким образом, конъюнктивальное введение вакцины превосходит по эффективности подкожную вакцинацию.

Экспериментальные работы по конъюнктивальной вакцинации провели вакцинами из штаммов 19 B. abortus Rev-1 B. melitensis в производственных условиях на крупном и мелком рогатом скоте.

Для проверки эффективности конъюнктивального метода введения вакцины, в неблагополучном по инфекционному эпидидимиту и бруцеллезу мелкого рогатого скота хозяйстве привили 480 баранов – производителей в дозе по 100 млн. м. к.

Серологическое исследование 333 иммунизированных баранов провели через 5 месяцев и выявили 12 гол. (3,6 %) реагирующих в РСК. Одно животное дало положительные показания в РА, РСК И РБП. Бактериологические посевы биоматериала от них были отрицательными.

Перорально иммунизировали вакциной из штамма Rev-1 B. melitensis 3 тыс. голов мелкого рогатого скота (2 отары) в дозе по 5 млрд.м.к. Через 2 месяца выявили в одной отаре 0,5% реагирующих животных, в другой – 1,6%. В дальнейшем не отмечали подъема титров антител, окоты были без абортов бруцеллезного происхождения.

2.8. Результаты исследований по эффективности вакцинации при бруцеллезе верблюдов

Проведенные исследования являлись составной частью НТП 03.05.04.–«Разработать и внедрить в производство научно-обоснованную программу по оздоровлению животноводческих хозяйств страны от бруцеллеза сельскохозяйственных животных с учетом зональных особенностей и специализации животноводства». Мероприятия против бруцеллеза проводили в верблюдоводческом хозяйстве Туркменистана в 1990-1995 гг., где это заболевание имело стационарный характер. При серологическом исследовании в отдельных гуртах общественного поголовья реагировало на бруцеллез более 10% и среди частного поголовья - до 25% исследованных верблюдов. Наблюдали частые случаи абортов, мертворожденных верблюжат, рождения слабого, нежизнеспособного молодняка.

Для специфической профилактики бруцеллеза верблюдов мы применили 2 вакцины. Половину поголовья верблюдов прививали традиционно вакциной из штамма 19 B. abortus, другую - вакциной из штамма Rev-1 B. melitensis.

Полной дозой вакцины (40 млрд. м.к.) из штамма 19 B. abortus, иммунизировали молодняк годовалого возраста, а взрослых верблюдов ревакцинировали малой (3 млрд. м.к.) дозой вакцины. Вакцину из штамма Rev-1 B. melitensis использовали для первоначальной прививки годовалого молодняка в дозе 3 млрд. м.к., а для ревакцинации взрослых животных – в дозе 0,5 млрд. м.к.

Серологические исследования верблюдов проводили в РА, РСК и РБП. Для постановки серологических реакций использовали биофабричные антигены и антигены собственной разработки. Технология изготовления диагностикума та же, что и для единого бруцеллезного антигена, с той лишь разницей, что в нашей модификации кроме бруцелл из 19-го штамма использовали местные штаммы, выделенные из абортированных плодов коз и верблюдов. Для получения цветного антигена окраску бакмассы бруцелл проводили, используя растительные пигменты местной флоры.

При постановке кольцевой реакции (КР) молоко верблюдов смешивали пополам с молоком коровы. Связано это с тем, что жировые шарики верблюжьего молока структурно отличаются от коровьего меньшими размерами и другими физико-химическими свойствами и делает невозможным постановку КР обычным методом.

После вакцинации у животных неблагополучного гурта прекратились аборты бруцеллезного происхождения и выявление положительно реагирующих животных. Хозяйство оздоровлено от бруцеллеза верблюдов.

В течение 4-х лет проводили испытание эффективности комплексной вакцинации верблюдов против бруцеллеза и сибирской язвы. Для этой цели части поголовья (500 гол.) вводили вакцину против бруцеллеза подкожно в полной дозе. С противоположной стороны вводили вакцину против сибирской язвы в дозировке, согласно наставлению. У вакцинированных животных не наблюдали отклонений от физиологической нормы. У верблюдов, вакцинированных двумя вакцинами, титр агглютинирующих бруцеллезных антител был выше, чем у животных, привитых только бруцеллезной вакциной. Эффективность комплексного введения вакцин определяли по эпизоотологическим показателям. В течение 3-х лет не выявили разницы в показателях благополучия у животных, привитых комплексно двумя вакцинами и моновакциной против бруцеллеза.

2.9. Конструирование вакцин на основе стрессорных белков как фактора патогенности (протективного антигена)

Нами проведено конструирование вакцин, иммунизирующим компонентом которой является фактор вирулентности, выделенный из бруцелл в результате кислотного, оксидативного и теплового стресса.

Полученный нами протективный антиген имеет молекулярную массу не более 30 kda, в чистом виде он не обладает антигенными свойствами, выявляемыми общепринятыми методами диагностики бруцеллеза. Для повышения иммуногенности протективный антиген конъюгировали с полимерными и корпускулярными носителями, а также с иммуномодуляторами различного происхождения. Для стимуляции образования супероксидных и гидроксильных радикалов и фермента – супероксиддисмутазы вводили в состав препарата металлы в ионной и высокодисперсной форме.

Выявили выраженное свойство препарата для «провокации» скрытых форм бруцеллеза, что облегчало проведение диагностических исследований животных.

Протективный антиген, выделенный из вирулентного штамма, превышает иммуногенность антигена, полученного из вакцинного штамма. Показано, что биохимический состав и количество действующего вещества в иммунизирующих препаратах, изготовленных из вирулентных и вакцинных штаммов, примерно одинаково, а иммуногенные их свойства существенно разнятся.

Превышение определенной пороговой дозы протективного антигена не увеличивает иммуногенные свойства, а вызывает состояние «иммунного паралича». У морских свинок, получивших «надпороговую» дозу препарата, искусственное заражение вызывает бурную реакцию на месте введения бруцелл заражающего штамма (феномен Артюса). В паренхиматозных органах и лимфатических узлах отмечены ярко выраженные патологоанатомические изменения. Бруцеллы заражающего штамма выделяли практически из всех органов и лимфатических узлов. Индекс инфицированности в 2-3 раза превышает аналогичные показатели у контрольных животных.

Введение «надпороговой» дозы протективного антигена у белых мышей угнетает синтез антител на введение чужеродного антигена и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). При этом угнетение иммунной системы не носит специфический характер.


загрузка...