ФАКТОРЫ И УСЛОВИЯ, РЕГУЛИРУЮЩИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ БУККАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ И ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С CANDIDA ALBICANS (21.04.2015)

Автор: Лукова Ольга Алексеевна

Микробные метаболиты

Контроль 1,1 ± 0,3 63,35 ± 7,2 27,4 ± 2,5 28,5 ± 2,8 90,7 ± 7,6

C. albicans 601 1,4 ± 0,2 64,76 ± 8,3 32,7 ± 3,1 34,2 ± 3,3 ? 97,5 ± 8,2 ?

C. glabrata 441 1,6 ± 0,3 63,60 ± 7,5 32,4 ± 2,7 34,0 ± 3,0 ? 96,0 ± 7,8 ?

C. krusei 583 1,7 ± 0,3 58,58 ± 6,9 35,9 ± 3,3 37,6 ± 3,6 * ? 94,5 ± 7,2 ?

S. aureus 5983 2,4 ± 0,5 * 45,91 ± 6,5* 17,1 ± 2,9* 19,5 ± 3,4 * ? 63,3 ± 7,8 * ?

E. faecium 179/2 0,4 ± 0,2 53,71 ± 7,1 15,2 ± 2,3* 15,6 ± 2,5 * ? 68,9 ± 8,5 * ?

E. coli 205 1,1 ± 0,3 69,31 ± 9,1 18,3 ± 2,1* 19,4 ± 2,4 * ? 87,6 ± 8,4 ?

* – достоверность отличий относительно контроля в группе факторов (р< 0,05)

? - увеличение, ? - снижение показателя

(а) (б)

Рис.2. Процент буккальных эпителиоцитов, экспрессирующих TLR-2 и TLR-4 в популяции здоровых доноров (а) и пациентов с заболеваниями пародонта (б).

- экспрессия только TLR-2; - только TLR-4; - экспрессия TLR-2/ TLR-4.

- TLR-2/ TLR-4 –негативные клетки

В то же время, иммуномодуляторы разнонаправлено стимулировали экспрессию toll-подобных рецепторов на эпителиоцитах (см. табл. 5). Так, количество эпителиальных клеток, экспрессирующих TLR-2 под влиянием препаратов «Иммунал» и «Деринат» значительно увеличивалось (р<0,05), тогда как «Полиоксидоний» и «Гриппферон» вызывали заметное снижение числа TLR-2 - позитивных клеток (р<0,05). Способность подавлять экспрессию TLR-4 отчетливо наблюдалась у препаратов «Иммунал», «Деринат», «Ликопид» и «Полиоксидоний» (р<0,05). Отметим, что направленность изменений была схожей у иммуномодуляторов, принадлежащих к одной группе, например, у бактериальных препаратов («Рибомунил», «Имудон») и синтетических /полусинтетических препаратов («Полиоксидоний», «Ликопид») (см. табл. 5).

В серии экспериментов было произведено измерение экспрессии рецепторов на буккальных эпителиоцитах здоровых людей и пациентов с заболеваниями пародонта. Установлено, что среди буккальных эпителиоцитов здоровых людей общее количество TLR-4 - позитивных клеток выше, чем TLR-2 - позитивных. В то же время, у пациентов с заболеваниями пародонта процент эпителиоцитов, экспрессирующих TLR-4 снижался, а экспрессирующих TLR-2-увеличивался (р<0,05) (рис. 2а,б, рис. 3а,б). Одновременно существенно увеличивался процент клеток, способных производить оба рецептора (р<0,05).

Изменения уровня экспрессии TLR-2, а TLR-4 среди эпителиоцитов на фоне патологического процесса в полости рта (хронический пародонтит) позволили предположить следующее: экспрессия TLR-2 (в норме низкая) может быть связана с уровнем возбужденности клеток, поскольку она увеличивается при патологических состояниях. С другой стороны, экспрессия TLR-4 (в норме высокая) снижается при заболеваниях, это указывает на то, что данный признак, возможно, связан со способностью клетки отвечать на стимулы, т.е. отражает ее реактивность. Отметим, что на снижение реактивности клеток при пародонтите указывает также и то, что количество TLR-2-/ TLR-4 - негативных клеток (не способных экспрессировать данные TLRs) резко увеличивается при данной патологии (рис. 2 а, б).

Было замечено, что у больных с пародонтитом изменения процентного соотношения TLR-2 и TLR-4-позитивных клеток после воздействия иммуномодуляторов выражены слабее, чем у здоровых доноров (рис. 3 a,б). Это, возможно, связано с тем, что буккальные клетки уже подверглись воздействию со стороны эффекторов воспаления, что, возможно, повысило уровень возбуждения (активность) пула эпителиоцитов и одновременно снизило возможность отвечать (реактивность) на дополнительные стимулы. С другой стороны, появления значительного числа клеток у больных пародонтитом, экспрессирующих одновременно TLR-2 и TLR-4 (рис. 3 б) могло сглаживать результаты воздействия иммуномодуляторов. Проанализировав полученные данные, мы пришли к выводу, что для оценки действия иммуномодуляторов при патологии удобнее рассматривать колебания фракций эпителиоцитов, экспрессирующих только TLR-2 или TLR-4 (без учета фракции TLR-2/ TLR-4), поскольку изменения в этих фракциях резче выражены (рис. 3 а, в).

Известно, что экспрессия TLR может меняться в присутствии различных микроорганизмов ( HYPERLINK "http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=McClure%20R%5BAuthor%5D&cauthor =true&cauthor_uid=25161655" McClure R ., et al., 2014). Эксперименты позволили установить, что метаболиты всех исследуемых штаммов бактерий: S. aureus 5983, E.faecium 179/2 и E.coli 205 – подавляли клеточную экспрессию TLR-2 (см. табл. 5). Так, воздействие метаболитов S. aureus уменьшало общее количество TLR-2-позитивных клеток в 1,46 раза (р<0,05); метаболитов E.faecium и E.coli в 1,83 и 1,47 раз соответственно (р< 0,05). В то же время, метаболиты кандид различных видов: C. albicans 601, C.glabrata 441, C. krusei 583 – усиливали способность эпителиоцитов к экспрессии TLR-2, причем для экспериментов с супернатантами C. krusei эти изменения носили наиболее выраженный характер: количество TLR-2-позитивных клеток увеличивалось с 28,5 ± 2,8% (контроль) до 37,6 ± 3,6% (р< 0,05) (см. табл. 5).

Метаболиты бактерий преимущественно подавляли экспрессию TLR-4 на буккальных клетках: в экспериментах с супернатантами S. aureus и E.faecium количество TLR-4 – позитивных клеток существенно уменьшалось: в 1,43 и 1,32 раз соответственно (р< 0,05); эксперименты с метаболитами E. coli имели такую же тенденцию, но оказывали менее выраженный эффект (р> 0,05). В то же время, воздействие метаболитов кандид вело к некоторому увеличению процента TLR-4 – позитивных эпителиоцитов в популяции (р> 0,05).

Таким образом, результаты показали, что представители фунгальной и бактериальной микрофлоры, обладают разными механизмами регуляции экспрессии TLR-2 и TLR-4 на эпителиальных клетках слизистых оболочек.

TLR-2- или

TLR-4- позитивных

клеток

TLR-2- или

TLR-4- позитивных

Клетки,

экспресси-рующие только

TLR-2 или

Рис. 3. TLR-4 и TLR-2 – позитивные буккальные эпителиоциты здоровых людей (а) и пациентов с заболеваниями пародонта: до (контроль) (б) и после (в) обработки иммуномодулирующими препаратами.

- TLR-4- позитивные клетки; - TLR-2- позитивные клетки

* – достоверность отличий относительно контроля в группе (р < 0,05).

Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов в оценке эффективности применения иммуномодуляторов

и оральных антисептиков при некоторых хронических патологиях

Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов отражает состояние местного и системного гомеостаза организма, а также его нарушения при патологии (Маянский А.Н. и соавт. 2004; Полякова В.О. и соавт., 2015). В работе была рассмотрена возможность использования уровня естественной колонизации эпителиоцитов как критерия эффективности лечебно-профилактических мероприятий у больных с хроническими заболеваниями (микробная экзема, онихомикозом дрожжевого генеза, хронические заболевания респираторной системы) с использованием иммуномодуляторов и оральных антисептиков.

Больные с микробной экземой и онихомикозом дрожжевого генеза находились на амбулаторном лечении в ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава РФ (г.Н.Новгород). Пациенты получали терапию согласно стандарту лечения соответствующих патологий, по ранее разработанной схеме (Шебашова Н.В., и соавт., 2008). Антибиотики назначались лечащим врачом в соответствии с данными резистограммы. У отдельных групп пациентов в схему лечения были добавлены иммуномодуляторы: «Полиоксидоний» (для больных с микробной экземой) и «Деринат» (для больных онихомикозом)

Исследования больных с микробной экземой проводились совместно с сотрудником из ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава РФ (г.Н.Новгород) Пышкиной Е.И. Показатель адгезии буккальных клеток у пациентов с экземой повышался до 36,79 ± 15,52 (р>0,05). Стандартная схема лечения больных приводила к снижению индекса естественной колонизации до 35,12 ± 15,21 бакт/эп. После комплексной терапии с использованием препарата «Полиоксидоний», индекс естественной колонизации снижался в большей степени и составлял 26,47 ± 12,03 бакт/эп, приближаясь к показателям в контрольной группе 14,31 ± 6,91 бакт/эп (р> 0,05).

Мы сравнили возможность использования различных параметров: индекса естественной колонизации буккального эпителия, растворимых молекул межклеточной адгезии sICAM-1 и иммуноглобулинов IgG, IgЕ для оценки выраженности патологического процесса и эффективности терапии у больных с микробной экземой. Исследования показали, что концентрация sICAM-1 и IgE в сыворотке также повышалась при патологии, однако, в отличие от индекса естественной колонизации, не отражала динамику положительных изменений в ходе лечения заболевания (табл. 6).

На следующем этапе проводили оценку естественной колонизации буккального эпителия на фоне комплексного лечения онихомикозов, вызываемых грибами рода Candida с использованием препарата «Деринат».

Таблица 6


загрузка...