Восстановление эпителиальных тканей с использованием криоконсервированных жизнеспособных дермотрансплантантов и живого эквивалента кожи (20.04.2009)

Автор: Ивашкин Александр Николаевич

Результаты оценки жизнеспособности дермотрансплантатов

в зависимости от сроков забора после смерти донора

Время забора дермотрансплантата с

момента смерти

часы Количество

клеток не включающих краситель

(%) Радиоактивность включившегося С14 – лейцина на 100 тыс. клеток

(имп/мин)

Результаты

культивирования

До 3 87 + 2 2124 + 114 Многослойный пласт кератиноцитов

До 6 86 + 3 1827 + 74 Многослойный пласт кератиноцитов

До 12 83+ 6 1909 + 77 Многослойный пласт кератиноцитов

До 17

1578 + 122 Колонии на площади не менее 50% культурального флакона

18 – 21

65 + 5 Первоначальное прикрепление клеток к субстрату подложки без признаков колонизации и последующая их гибель

Дермотрансплантат от живых доноров 87 + 2 2086 ± 212 Многослойный пласт кератиноцитов

Минимальные критерии жизнеспособности дермотрансплантата

65 + 10

577 ± 103 Колонии на площади не менее 50% культурального флакона

С целью выбора оптимальных условий хранения было изучено влияние различных сред и температурных режимов на жизнеспособность кожи. В результате исследований была создана среда для криоконсервации «Криодерм» ТУ 9385-012-45171785-2007. Регистрационное удостоверение №ФСР 2007/01248 от 22 ноября 2007 года. После хранения в консерванте «Криодерм», содержащем эпидермальный фактор роста, происходит иммобилизация части эпидермального фактора роста на аллодермотрансплантат, что оказывает влияние на репаративные процессы, протекающие в ране.

В качестве температурного режима хранения использовались: -180С и -700С. Температурный режим -180С легко достижим в морозильных камерах обычных бытовых холодильников. Предельный рекомендованный срок хранения кожи при -180С составляет 10 суток. При -700С - 30 -45 суток, при -1960С кожа остается жизнеспособной не менее одного года. Окончательно же определить возможные сроки хранения каждого конкретного образца кожи можно, только лишь зная его исходную жизнеспособность.

При работе по забору аллодермотрансплантатов руководствовались директивой начальника Главного военно-медицинского управления МО РФ ДМ-9, от 20 марта 1996 г. «Об организации заготовки и трансплантации донорских органов в военных лечебных учреждениях». Заготовка тканей осуществлялась после осмотра трупа судебно-медицинским экспертом (согласно «Правилам судебно-медицинской экспертизы трупа» от 01 января 1997 г.), который давал разрешение на изъятие тканей и ознакомления с сопровождающими труп документами. Взятие кадаверной кожи осуществляли при помощи электродерматома толщиной около 0,3 мм в условиях перевязочной, с соблюдением правил асептики и антисептики.

В основном в качестве доноров использовались пострадавшие с тяжелой сочетанной травмой – 47%. Интервал времени с момента летального исхода до забора кожного трансплантата составил 12,4+2,7 часа. Обусловлен оформлением необходимых документов (посмертный эпикриз, сопроводительные документы и т.д.) и временем, необходимым для доставки трупа на специальном транспорте из лечебного учреждения в патологоанатомическое (судебно-медицинское) отделение. Всего было заготовлено около 22000 см2 аллогенной кожи от 21 донора. С одного донора осуществлялся забор от 500 до 1500 см2 аллокожи. Срок хранения - до 10 суток. Он был связан с необходимостью получить и оценить результаты вскрытия донора, данные анализов, а также максимальным сроком хранения жизнеспособной кожи при использованном температурном режиме хранения –180С. Размораживание закрытых флаконов с криоконсервированной кожей производили в водяной бане или под проточной водой при температуре +380С…+420С до полного исчезновения кристаллов льда непосредственно перед проведением трансплантации.

«Живой эквивалент кожи», информация о методе. Трансплантат представляет собой многокомпонентную трехмерную структуру. Характеристики и биологические свойства живого эквивалента кожи максимально приближены к характеристикам и свойствам живой ткани, это дает возможность использовать его в качестве заместителя утраченных полнослойных дефектов кожи. Восстановление целостности кожного покрова происходит за счет его приживления после трансплантации, стимуляции репаративных процессов в ране и формирования в месте трансплантации эпидермального и дермального слоев кожи.

Источником для получения постнатальных кератиноцитов и фибробластов человека служит кожа, получаемая в ходе пластических операций. С целью обеспечения биологической безопасности доноры исходного материала подвергаются тестированию на ВИЧ, сифилис, гепатиты В и С. Культивирование клеток и приготовление живого эквивалента кожи производится в стерильных условиях лабораторного бокса. Трансплантат поставляется в чашках Петри диаметром 9 см в стерильной упаковке. Транспортировка осуществляется в термоизолирующих контейнерах. Возможные сроки хранения составляют 48 часов в термостате при температуре от +26 до +370С. Живой эквивалент кожи (ЖЭК) представляет собой гелеобразную субстанцию розового цвета, включающую синтетическую сетчатую основу (Рис. 1.)

Рис. 1. Схема живого эквивалента кожи

Критерии готовности раневой поверхности – аналогичны требованиям, предъявляемым к раневой поверхности перед аутодермопластикой. Первая перевязка после трансплантации осуществляется на 5-е сутки после трансплантации. При промокании повязки гнойным отделяемым перевязка производится немедленно. При отсутствии признаков инфекционных раневых осложнений последующие перевязки производятся на 5-е сутки от предыдущей. При необходимости выполняется повторная трансплантация.

Характеристика клинических групп больных: Для решения поставленных задач был выполнен анализ материалов собственных наблюдений и ретроспективное изучение историй болезней 445 пациентов, находившихся на лечении с 1998 по 2008 гг. в городской клинической больнице №29 «Утоли моя печали»г.Москва и ГКБ г. Мытищи (Московская область).

В зависимости от этиологии заболевания и проводимой тактики лечения было выделено 14 групп больных (7 основных и 7 контрольных), табл. 2.

Больным всех групп проводили лечение в соответствии с основным заболеванием и сопутствующей соматической патологией. Назначались антибиотики широкого спектра действия. В дальнейшем производилась коррекция антибиотикотерапии в соответствии с результатами антибиотикограммы. По показаниям проводили инфузионную терапию, противовоспалительную, общеукрепляющую и иммунотерапию. Назначали физиотерапию, лечебную физкультуру.

Раневой дефект при поступлении в стационар обрабатывали раствором антисептика, некротизированные ткани удаляли механическим путем, накладывали повязки с протеолитическими ферментами, а в дальнейшем мази на водорастворимой основе («Левосин», «Левомеколь»).

Таблица 2

Распределение пациентов по группам.

Использованный метод лечения Патология/

Травма Группа

пациентов* Мужчины Женщины Ито-го

Абс % Абс %

Криоконсервированные жизнеспособные аллогенные дермотрансплантаты Длительно незаживающие раны


загрузка...