Иммунологические и структурно-метаболические нарушения у доношенных детей с гипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы, прогнозирование исходов и оптимизация лечения (20.04.2009)

Автор: Громада Наталья Евгеньевна

1:4 ?>0,05

14 дней в 266,4±1,09 194,0±5,29 127,6±1,58 267,8±2,96 1:2, 1:3, 2:3, 2:4, 3:4 ?<0,05

1:4 ?>0,05

1 мес. г 224,5±5,9 336,5±5,58 109,1±2,48 239,4±7,8 1:2, 1:3, 2:3, 2:4, 3:4 ?<0,05

1:4 ?>0,05

3-6 мес. д 231,1±7,04 238,0±6,54 230,5±5,82 232,5±6,7 1:2, 1:3, 2:3, 2:4, 3:4, 1:4 ?>0,05

Достоверность отличий а:б, а:в, а:г, а:д, б:г,в:г-

?<0,05

г:д - ?>0,05 а:б, а:в, а:г, а:д, б:г, г:д, в:г -?<0,05 а:б, а:в, а:г, а:д, б:г, г:д, в:г -?<0,05 а:б, а:в, а:г, а:д, б:г,в:г -?<0,05

г:д - ?>0,05

Наличие представленных корреляционных связей между продукцией кортизола и уровнем цитокинов указывает на связующую роль цитокиновой регуляторной сети в механизмах нейроиммуноэндокринного модулирования и нейродеструктивных процессов (r=0,64, r=0,74) при гипоксическом перинатальном поражении ЦНС (рис. 6, 7).

Количественное определение ДНК в ядрах лимфоцитов периферической крови у новорожденных при гипоксическом перинатальном

поражении ЦНС

Для оценки степени гипоксии мы разработали метод кариометрии лимфоцитов: количественное определение ДНК в ядрах лимфоцитов периферической крови по оптической плотности (чувствительность метода – 89%, специфичность – 96%). Обследовано 195 доношенных новорожденных в течение 1 года. Их них 150 детей с различной степенью тяжести поражения ППЦНС. Контрольная группа составила 45 здоровых детей.

Опытным путем установлено, что среднее количественное значение ДНК в ядрах лимфоцитов исследуемых популяций констатирует степень тяжести гипоксического поражения центральной нервной системы у новорожденных в 1-3 сутки, и в течение 1-го месяца жизни имеет прогностическое значение.

Результаты исследования кариометрии лимфоцитов показали, что чем ниже показатели оптической плотности ядер лимфоцитов периферической крови новорожденных, тем тяжелее церебральные нарушения. Для легкой степени тяжести показатели кариометрии – 3000-3050 услов. ед., для средней – 2088-2125, для тяжелой – 910-938. У новорожденных А2 и А3 групп в первые трое суток определялось снижение (?<0,001)) среднего количества ДНК в ядрах лимфоцитов в 2-3 раза по сравнению с группой здоровых детей. У больных с формированием органического поражения ЦНС показатели кариометрии были достоверно низкими в остром и раннем восстановительном периодах (?<0,001). Восстановление показателей наблюдалось после первого полугодия жизни.

В А1 группе у детей с легким поражением ЦНС на 5-7 сутки жизни отмечалось увеличение среднего количества ДНК в ядрах лимфоцитов (?<0,001) и нормализация показателей к 28 дню жизни. Повышение показателей у детей с легкой гипоксией на 5-7-е сутки указывает на высокие компенсаторные возможности этих детей (рис. 8).

По видимому, на фоне тяжелой гипоксии запускаются механизмы нарушения репликации ДНК, что сопровождается активацией апоптоза.

Рис. 8. Динамика средних величин оптической плотности ядер лимфоцитов (кариометрия) в зависимости от степени тяжести гипоксического поражения центральной нервной системы у детей

Возможно, опосредованное цитокинами и нарушением энергообмена количественное снижение ДНК в ядрах лимфоцитов в условиях гипоксии, нарушает трансформацию пролимфоцитов в полноценные лимфоциты (иммунокомпетентные клетки), участвующих в иммунных реакциях и процессах клеточного энергетического метаболизма центральной нервной системы (r= - 0,79).

Анализ показателей активности ферментов митохондриальных и клеточных ферментов лимфоцитов у детей при ППЦНС

гипоксического генеза

Анализ показателей активности ферментов показал, что у новорожденных с легкой степенью поражения ЦНС отмечается компенсаторное повышение СДГ и ?-ГФДГ, ЛДГ и ГДГ, что указывает на активацию аэробного и анаэробного путей превращения глюкозы и обеспечивает динамическое равновесие окислительно-восстановительных реакций, протекающих в лимфоцитах.

На фоне тяжелой перинатальной гипоксии обнаружено состояние повышенного энергетического метаболизма лимфоцитов в первые 3-е суток (СДГ, ?-ГФДГ, МДГ, ГДГ и ЛДГ) аналогично группам А1 и А2 групп.

Рис. 9. Динамика цитохимического анализа активности митохондриального фермента СДГ в лимфоцитах детей с перинатальным поражением ЦНС гипоксического генеза

В дальнейшем на 5-7 сутки наблюдалось снижение активности СДГ, в некоторых случаях до низких значений и активности ЛДГ у доношенных детей с тяжелой интранатальной гипоксией (группа А3) на фоне ИВЛ и СДР. В совокупности это отражает угнетение аэробного и анаэробного клеточного энергообмена, что для клетки является энергетической «катастрофой» (?<0,05). Эти показатели ассоциируются с тяжелыми неврологическими синдромами острого периода (r= 0,89) (рис. 9-11).

Одновременно у детей А3 группы на 5-7-е сутки достоверно снижались показатели ?-глицерофосфатдегидрогеназы, участвующей в глицерофосфатном переносе восстановительных эквивалентов из цитозоля в митохондрии (?<0,001).

Рис. 10. Динамика цитохимического анализа активности митохондриального фермента ?-ГФДГ в лимфоцитах детей с перинатальным поражением ЦНС гипоксического генеза

Рис. 11. Динамика цитохимического анализа активности клеточного фермента ЛДГ в лимфоцитах детей с перинатальным поражением ЦНС гипоксического генеза

На следующих этапах исследования в раннем восстановительном периоде у детей А2 и А3 групп состояние энергообмена характеризовалось дефицитом активности митохондриальных ферментов СДГ, ?-ГФДГ и повышением МДГ и ГДГ на фоне тенденции к снижению лимфоцитов, лимфопении - СД20+ (r=0,92). Стабилизация показателей клеточного энергообмена наблюдалась к 9-12 мес. жизни. У детей, перенесших перинатальную гипоксию, определялась корреляционная взаимосвязь между нарушением энергетического метаболизма клеток и снижением функциональной активности надпочечников (уровнем кортизола в крови) r= 0,72.

Результаты исследования иммунологических, цитокин-гормональных реакций, определения количества ДНК в ядрах лимфоцитов, нейробиохимических маркеров апоптоза, показателей цитохимической активности ферментов энергообмена лимфоцитов позволили установить наличие их взаимосвязи в неонатальном периоде и прогностическое значение в зависимости от степени тяжести гипоксического поражения ППЦНС у детей в период новорожденности. Дискриминантный и регрессионный анализ, определение парных и множественных корреляций вышеописанных результатов исследований позволили определить значимые информативные признаки неонатального периода в механизмах формировании адаптационно-компенсаторных реакций и патологических нейродеструктивных процессов при гипоксическом поражении ЦНС и представить их в виде патогенетических графических моделей (рис. 12, 13, 14).

Рис. 12. Механизмы формирования компенсаторно-адаптационных процессов ЦНС в неонатальном периоде у детей А1 группы

Рис. 13. Механизмы формирования компенсаторно-адаптационных процессов ЦНС в неонатальном периоде у детей А2 группы

Рис. 14. Механизмы формирования нейродеструктивных процессов ЦНС в неонатальном периоде у детей А3 группы

Сочетанное применение препарата Элькар и ИВТ в комплексном лечении гипоксического поражения ЦНС у детей

В комплексном лечении детей, перенесших перинатальную гипоксию, применение метаболически активных энерготропных препаратов обосновано. В частности, возможно использование L-карнитина (Элькар – 20% р-р L-карнитина), функции которого связаны с метаболизмом глюкозы, аминокислот, с транспортом жирных кислот из цитоплазмы в митохондрии, в которой происходит процесс (-окисления с образованием АТФ.

В основе ИВТ лежит биологически обратная связь, реализованная во взаимодействии электромагнитных излучений в миллиметровом, инфракрасном и части видимого диапазонов волн, модулированных информационными сигналами инфранизких частот, идентичных сигналам здоровых органов с биологическими структурами организма человека, с их информационными сигналами на молекулярном, клеточном, органном уровнях. Терапевтический эффект обусловлен воздействием на биологически активные точки. Ежедневно, на одну процедуру применяли 4-5 зон БАТ (VG-20, TR-19 справа и слева, VG-16, VG-14, VC-8). Воздействовали по 3 минуты на каждую зону. В процессе лечения зоны чередовали. Курс лечения 8-10 суток. Курсы лечения повторяли с перерывами в 2-4 недели, в течение 6-12 месяцев и более.

В основные группы исследования вошли доношенные новорожденные в зависимости от степени тяжести поражения ЦНС: Б1 группа – дети с гипоксической энцефалопатией средней степени тяжести (n=102), Б2 группа – дети с тяжелой гипоксической энцефалопатией (n=97). Группа Б1 была разделена на 3 подгруппы: Б1(б+Э) n=34, в которой дети с 4-х недель жизни получали кроме базисной терапии препарат Элькар; Б1(б+ИВТ) n=34 – в дополнение к базисной терапии – ИВТ; Б1(б+Э+ИВТ) n=34 – сочетание этих методов лечения. Аналогично составлены подгруппы наблюдения для детей группы Б2. Клинико-лабораторные характеристики группы Б3 (n= 36) и Б4- (n= 36) сравнения соответствовали Б1 и Б2 группам, но дети, входящие в их состав, не получали Элькар, ИВТ, а только базисную терапию. Суточная доза Элькара составляла 75-150 мг/кг в 2 приема, длительность 1-го курса не менее 1 -1,5 месяца. Затем курсы повторяли каждые 2 месяца в течение 3-х лет наблюдения. Средняя доза препарата составляла в первые 1-6 месяцев – 75-150мг/сутки, 6-12 месяцев от 150 до 225мг/сутки, 1 год – 3 года от 200 до 300мг/сутки.

Как показали результаты наблюдения, применение препарата Элькар в сочетании с ИВТ является наиболее оптимальным вариантом лечения у детей основных групп наблюдения. В возрасте 1 года (независимо от степени тяжести) дети формировали в 2 раза реже (?<0,001) резидуальную церебральную органическую недостаточность и патологические синдромы (табл. 9).

Таблица 9


загрузка...