Клинико-патогенетическое значение исследования аутоантител к ферментам антиоксидантной системы и пуринового метаболизма у больных ревматоидным артритом (13.07.2009)

Автор: Александров Андрей Вячеславович

Этап 1 Этап 3, M=8 Этап 3, М=1

форма 2 76% 56% 60%

активность 4 84% 80% 80%

течение 2 80% 60% 64%

Как видно из таблицы 40, наибольшую точность обеспечивает диагностика по единичным симптомам, однако она же происходит значительно дольше по времени, однако комплекс имеет при этом выраженную тенденцию предпочитать более часто встречающиеся диагнозы. Точность определения активности заболевания наиболее высока и практически не меняется от этапа к этапу. Точность определения формы и течения заболевания на этапе 3 падает, однако при использовании небольшой выборки (1-2 прецедента) комплекс чаще верно определяет редко встречающиеся варианты. Такая точность диагностики формы, активности и течения ревматоидного артрита является удовлетворительной и сравнима с точностью диагностики врача. Так, например, диагностические критерии, предложенные Американской ассоциацией ревматологов, используют большее количество информации, и имеют чувствительность на уровне 70% [Amett F.C., 1988, 2004].

Разработанный комплекс показал свою эффективность в опытной эксплуатации (на базе НИИ Клинической и Экспериментальной Ревматологии РАМН и отделения ревматологии МУЗ КБ№25 г. Волгограда). Включение новых лабораторных тестов по определению антител к ферментам АОС и ПМ в базу данных программно-информационного комплекса позволило оптимизировать количество применяемых при диагностике РА лабораторных исследований, сократить время диагностики и затраты на ее проведение.

Таким образом, комплексное изучение механизмов нарушения взаимодействия иммунной системы и биохимических процессов, протекающих на ферментном уровне, дает новое, более целостное, концептуальное представление о патогенезе РА, что позволяет разрабатывать более эффективные методы прогнозирования, мониторинга и лечения этого тяжелого заболевания.

Разработаны и апробированы способы получения иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами на основе ферментов АОС и ПМ в качестве антигенной матрицы. Фиксация ферментов в пространственную решетку полиакриламидного геля сохраняет их физико-химические и биологические свойства.

Антитела к изучаемым энзимам АОС и ПМ в условиях in vitro оказывают в основном ингибирующее влияние на их ферментативную активность: снижение активности СОД на 64,5%, ГР – на 47%, КАТ – на 41,8%, ЦП – на 48%, АДА – на 68,7%, 5(-НТ на 35,6%, ПНФ – на 42,1%, ГДА – на 55,2%. Взаимодействие растворимой формы КО с аутоантителами ведет к увеличению активности энзима минимум на 20% за счет усиления трансформации D-формы фермента в О-форму. Иммобилизация обеспечивает включение энзима в жесткую структуру геля, препятствует существенным пространственным изменениям его молекулы и сохраняет фермент для взаимодействия антиген–антитело.

Комплексное сравнительное исследование иммунных нарушений и изменения биохимических процессов установило существенные изменения в содержании аутоантител к ферментам АОС и ПМ у больных ревматоидным артритом по сравнению со здоровыми лицами и больными остеоартрозом, что может отражать напряженность гуморального звена иммунитета.

У пациентов с ОА были выявлены достоверно более высокие уровни антител к ГР, АДА, ЦП, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО по сравнению со здоровыми лицами. Выраженность обнаруженных сдвигов была более значимой у больных с полиостеоартрозом (увеличение уровня антител к 5'-НТ, ПНФ) и при наличии у больных ОА синовита (увеличение уровня антител к КО).

При РА были выявлены достоверно более высокие по сравнению со здоровыми лицами и больными ОА уровни антител к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО. Выраженность обнаруженных сдвигов была бoльшей при максимальной степени активности РА, быстропрогрессирующем течении (по уровню антител к СОД, ПНФ, ГДА, КО), при наличии системных проявлений заболевания. У пациентов РА с анемией были достоверно более высокие уровни антител к СОД, КАТ и ЦП, а при наличии ревматоидного васкулита – уровни антител к 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО. Антитела к 5(-НТ чаще и в более высоком титре выявлялись у пациентов с поражением почек, сердца и органов РЭС. Уровени антител к ПНФ у больных РА повышались при наличии поражения почек и печени. Антитела к ГДА и ЦП чаще и в более высоком титре выявлялись у пациентов с поражением печени, а антитела к КО – при наличии признаков поражения нервной системы и органов РЭС.

Исследование взаимосвязи процессов аутоантителогенеза к ферментам АОС и ПМ с изменением активности ферментов в сыворотке крови больных РА показало обратную корреляцию умеренной силы между уровнем аутоантител к СОД, ГР, 5(-НТ, ПНФ и активностью соответствующего фермента. Нарастание уровня антител к КО в сыворотке крови больных РА сочеталось с увеличением активности КО, коэффициента КО/КДГ и снижением активности КДГ.

Оценка КЖ позволяет получить подробную информацию о физическом, психологическом и социальном функционировании пациента, что особенно важно при лечении длительно текущих, хронических заболеваний. При РА отмечены исходно низкие показатели КЖ, не поддающиеся быстрой нормализации на стационарном этапе лечения, особенно у больных с выраженными иммунологическими сдвигами.

Положительная динамика антител к ферментам АОС и ПМ, наблюдаемая на фоне проводимой терапии, позволяет использовать данные показатели в качестве дополнительного критерия эффективности лечения больных РА наряду с традиционными клинико-лабораторными показателями.

Сравнительный анализ клинико-лабораторных показателей позволил определить, что наиболее чувствительными и специфичными тестами при проведении дифференциальной диагностики воспалительных и дегенеративных заболеваний суставов является определение антител к ГДА и 5'-НТ; при разграничении больных РА от больных с другими РЗ, протекающих с суставным синдромом, предпочтение следует отдавать определению антител к ПНФ, 5'-НТ и СОД (в порядке убывания диагностической значимости).

Разработанная и реализованная в ходе опытной эксплуатации экспертная система поддержки диагностики ревматических заболеваний показала свою эффективность, позволила оптимизировать количество проводимых при РА лабораторных исследований без снижения точности диагностики, а также сократить время диагностики, обеспечив значимый экономический эффект.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Применение варианта непрямого иммуноферментного метода на основе ИГАП с использованием иммобилизированных ферментов в качестве антигенной матрицы для определения аутоантител к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО по чувствительности значительно превосходит традиционные варианты иммунофлуоресцентного метода и гетерогенный иммуноферментный метод анализа, использующий в качестве твердой фазы полистироловый планшет, и может быть рекомендовано для выявления антиферментных антител.

При определении аутоантител иммуноферментным методом с использованием ИГАП за границы нормы следует считать: 0,104 ед. для Ат к СОД, 0,095 ед. для Ат к ГР, 0,105 ед. для Ат к КАТ, 0,092 ед. для Ат к ЦП, 0,068 ед. для Ат к АДА, 0,082 ед. для Ат к 5'-НТ, 0,097 ед. для Ат к ПНФ, 0,078 ед. для Ат к ГДА и 0,097 ед. для Ат к КО.

Рекомендуется использовать определение содержания антител к ферментам АОС и ПМ как дополнительный лабораторный критерий активности и тяжести ревматоидного артрита. Для минимальной активности РА характерно содержание антител к СОД от 0,050 до 0,110 Ед, Ат к 5'-НТ – от 0,050 до 0,085 Ед, Ат к ПНФ – от 0,052 до 0,112 Ед, Ат к ГДА – от 0,002 до 0,126 Ед, для Ат к КО – от 0,055 до 0,110 Ед; для умеренной активности РА характерно содержание антител к СОД от 0,045 до 0,190 Ед, Ат к 5'-НТ – от 0,043 до 0,210 Ед, Ат к ПНФ – от 0,050 до 0,235 Ед, Ат к ГДА – от 0,022 до 0,135 Ед, для Ат к КО – от 0,052 до 0,230 Ед;, для высокой активности РА характерно содержание антител к СОД от 0,170 до 0,240 Ед, Ат к 5'-НТ – от 0,115 до 0,295 Ед, Ат к ПНФ – от 0,175 до 0,245 Ед, Ат к ГДА – от 0,040 до 0,130 Ед, для Ат к КО – от 0,180 до 0,240 Ед. Стойкое повышение антител к СОД (в диапазоне 0,145-0,170 Ед), Ат к ПНФ (в диапазоне 0,135-0,170 Ед), Ат к ГДА (в диапазоне 0,07-0,095 Ед), Ат к КО (в диапазоне 0,14-0,165 Ед) свидетельствует о быстро прогрессирующем варианте течения РА.

Повышение у больных РА уровня антител к ЦП (выше 0,190 Ед) и ГДА (выше 0,085 Ед) может свидетельствовать о поражении печени, антител к 5'-НТ (выше 0,145 Ед) и антител к ПНФ (выше 0,165 Ед) – почек и органов сердечно-сосудистой системы, антител к КО (выше 0,160 Ед) – поражении нервной системы.

Определение антител к ферментам АОС и ПМ в сыворотке крови больных РА наряду с общепринятыми клинико-лабораторными показателями рекомендуется использовать для оценки эффективности проводимой терапии. Нормализация показателей содержания антител к СОД, ЦП, 5(-НТ, ПНФ коррелирует с клиническим улучшением.

Увеличение у больных ОА количества антител к КО более 0,07 Ед рекомендуется рассматривать в качестве показателя тяжести поражения суставов.

ПУБЛИКАЦИИ

Гонтарь И.П., Александров А.В., Джалал А.К., Сычева Г.Ф. Магносорбенты в лечении ревматоидного артрита // Тезисы докладов. III Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", Москва, 1996. – С.100-101.

Zborovskaya I.A. Gontar I.P., Alexandrov A.V., Zborovsky A.B. Immunosorbtion as a stage in immunomodultion therapy of rheumatoid arthritis // 10th Symposium of the European League against Rheumatism, Vienna, Austria, 1997. – Р.29.

Зотина М.В., Александров А.В., Сычева Г.Ф. Определение антител к каталазе у больных ревматоидным артритом с использованием иммобилизированных магнитосорбентов // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии», Волгоград, 1999. – С.49.

Зотина М.В., Александров А.В., Боброва Л.Н., Бояров Д.В., Гонтарь И.П. Клиническая значимость определения активности каталазы и антител к каталазе у больных ревматоидным артритом // Материалы юбилейной конференции, посвященной 15-летию НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН. - Волгоград. - 2000 г. С 79-80

Гонтарь И.П., Александров А.В., Зотина М.В., Петрова Н.В., Сычева Г.Ф., Язид Аль Раави, Красильников А.Н., Зборовская И.А. Антителогенез к ферментам антиоксидантной системы у больных ревматоидным артритом // Тезисы III Съезда ревматологов России, Рязань, 22-25 мая 2001 г. // Научно-практическая ревматология, 2001, №3. – С. 27.

Гонтарь И.П., Александров А.В., Зотина М.В., Сущук Е.А., Петрова Н.В., Язид Аль Раави, Красильников А.Н., Зборовская И.А. Изучение взаимосвязи энзимологических и иммунных механизмов в развитии ревматоидного артрита, системной красной волчанки и системной склеродермии // Материалы научно-практической конференции «Актуальные проблемы внутренней патологии», Челябинск, 2001. – С.154 – 158.

I.P. Gontar, A.V. Alexandrov, G.F. Sycheva, O.I. Emelyanova, L.A. Maslakova, E.A. Suschuk, N.V. Petrova, A.B. Zborovsky Experimental autoantibodies immunosorption using specific magnosorbents in rheumatic disease // Annual European Congress of Rheumatology, EULAR 2002, Stockholm, 12-15 June 2002. Abstracts. «Annals of the Rheumatic Diseases», Vol. 61, Supplement 2. – P. 359.

Гонтарь И.П., Александров А.В., Зборовская И.А. Изучение антителогенеза к ферментам антиоксидантной системы у больных ревматоидным артритом при помощи магнитосорбентов // Труды Всероссийской конференции «Проблемы медицинской энзимологии» / «Современные технологии лабораторной диагностики нового столетия», Москва, ЦДХ, 28-31 мая 2002 г. – С. 61-62.

Zborovskiy A.B., Alexandrov A.V., Petrova N.V., Suschuk E.A.,Sycheva G.F. Generation of antibodies to antioxidant system enzymes as a pathogenetic factor leading to anemia in rheumatoid arthritis patients // Kongress der Deutschen Gesellschaft fur Rheumatologie, Frankfurt/Main, 3-6 September 2003. «Zeitschrift fur Rheumatologie», 2003, Vol. 62., Supplement 1. – P 67.

Зборовский А.Б., Гонтарь И.П., Зборовская И.А., Александров А.В. Новые биотехнологии в иммунодиагностике поражения сосудов у больных ревматическими заболеваниями // Вестник Российской академии медицинских наук. 2003, №12; С.20-24.

Зборовский А.Б., Гонтарь И.П., Александров А.В. Применение новых технологий при создании нового класса иммуносорбентов для лечения ревматических заболеваний // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в лечении и реабилитации больных с патологией суставов», Курган, 24-25 марта 2004 г. – С.114-116.

Александров А.В., Никитин М.В., Петрова Н.В., Сизова М.В., Маслакова Л.А., Гонтарь И.И., Зборовская И.А. Новые возможности контроля эффективности терапии ревматоидного артрита с помощью магнитоуправляемых сорбентов на основе церулоплазмина // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии и кардиологии», выпуск 21, Волгоград, 2004. – С.6-7.

Гонтарь И.П., Александров А.В., Шилова Л.Н., Петрова Н.В., Красильников А.Н., Емельянова О.И., Зборовский А.Б. Использование современных биотехнологий при создании нового класса иммуносорбентов для лечения ревматоидного артрита // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии и кардиологии», выпуск 21, Волгоград, 2004, – С.20-21.

Александров А.В., Гонтарь И.П., Зборовская И.А. Экономические аспекты применения экстракорпоральных методов при лечении ревматоидного артрита // Тезисы Научно-практической конференции «Социальные аспекты ревматических заболеваний», посвященной 60-летию Российской Академии медицинских наук, Звенигород, 27-28 мая, 2004. – Научно-практическая ревматология, 2004, №2. – С.70.

E.A. Sushchuk, I.P. Gontar, A.V. Alexandrov, S. Rasem, A.L. Shipaeva, A.B. Zborovsky. Immunological testing for connective tissue diseases // Annual European Congress of REUMATOLOGY, Berlin, 9-12 June 2004. Absracts. «Annals of the Rheumatic Diseases». Juli 2004, Vol. 63, Supplement 1. – P.473.


загрузка...