Гемоглобины человека: иммунобиохимическая характеристика и медико-биологическое значение (12.10.2009)

Автор: Кривенцев Юрий Алексеевич

0,50-0,52**

0,309±0,010*

0,679±0,024*

Изоэлектрическая точка 7,0±0,1*

6,95-7,18** 7,3±0,15*

7,4-7,6** 7,1±0,13*

6,9-7,15** 6,85±0,1*

Резистентность к действию щелочей Неустой-чив***

Неустой-чив***

Устой-чив***

Относительно устойчив*

Устойчив**

Пероксидазная и каталазная активность Активен*** Активен*** Активен*** Активен***

Характеристические окраски:

белки (амидочерный)

общее железо (красная кровяная соль)

на гемоглобины (бензидин, гваякол)

гликопротеиды (Шифф)

липопротеиды (судан)

Гомогенность Гомогенен при э/ф в агарозе и ПААГ*** Гомогенен при э/ф в агарозе и ПААГ*** Гомогенен при э/ф в агарозе и ПААГ*** Гомогенен при э/ф в агарозе, гетерогенен при э/ф в ПААГ***

* - собственные данные

** - данные других авторов (Стародуб Н.Ф. (1987), Иржак Л.И. (1985))

*** - собственные и литературные данные совпадают

-**** - данные в литературе отсутствуют

Можно констатировать несовпадение литературных и полученных нами средних значений относительной электрофоретической подвижности по HbA1 в ПААГ и агарозном геле и по HbF в агарозе. При этом полученные результаты заслуживают доверия в силу большой выборки количества проведенных идентичных экспериментов. Впервые получены статистически достоверные данные по относительной электрофоретической подвижности HbP в полиакриламидном и агарозном гелях и HbA2 в агарозном геле и значению его изоэлектрической точки (t=3,29; Р<0,01).

Получены новые данные по действию некоторых детергентов на HbP. Отмечено, что действие тритонов различных видов снижает электрофоретическую подвижность HbP, мочевина и бихромат калия не изменяют электрофоретической подвижности HbP, но делают его фракцию гетерогенной. Впервые показано, что ДСН меняет вектор электрофоретической подвижности HbP на противоположный и увеличивает скорость движения этого белка.

Разработка новых способов выделения и очистки по каждому из изучаемых типов гемоглобина проводилась с учетом полученных на предыдущем этапе данных. Разработаны и апробированы оригинальные способы очистки по каждому из изучаемых типов гемоглобина. Новизна разработок состоит, прежде всего, в подборе оптимального методического сочетания и алгоритма выполнения способа получения чистого препарата по каждому белку.

Наиболее эффективным по большинству показателей является разработанный способ выделения и очистки фетального гемоглобина (рис. 2). Применение данного алгоритма приводит к получению белка наибольшей степени очистки с высоким его процентом в полученном препарате. Кроме того, данный способ оказывается наиболее экономным по биопродукту, выход которого довольно высок (табл. 5).

Таблица 5

Анализ качества выделения HbF

Основные этапы

выделения Общий

белок,

мг/л Кол-во

продукта, мг|л Целевой

продукт, % Степень

очистки HbF Выход

HbF (%)

Исходный материал 240189±316,2 3751±68,0 1,56 1 100

Получение гемолизата 128163±293,9 3118±73,2 2,42 1,55 82,66


загрузка...