Эффекты малообъемной перфузии крови, активированной гемосорбентами (12.07.2010)

Автор: Буркова Наталья Владимировна

3. Разработать методику малообъемной гемоперфузии и варианты ее применения у людей с различными видами патологии.

4. Изучить динамику изменения концентраций нитратов и нитритов в венозной крови, метаболитов арахидоновой кислоты, а также показателей удельной хемилюминесценции у пациентов с различными видами патологии до и в течение 30 мин после малообъемной гемоперфузии.

5. Определить динамику концентраций цитокинов плазмы крови у больных с критической ишемией нижних конечностей и воспалительными и гнойно-некротическими заболеваниями пальцев и кисти до и после малообъемной гемоперфузии.

6. Определить концентрации лактоферрина и миелопероксидазы в плазме венозной крови до и после малообъемной гемоперфузии у пациентов с воспалительными и гнойно-некротическими заболеваниями пальцев и кисти.

7. Провести анализ результатов применения малообъемной гемоперфузии в клинике и оценить степень эффективности использования данного метода при разных видах патологии.

Научная новизна. В результате экспериментально-клинических исследований впервые получены данные, которые позволяют оценить роль активации крови при малообъемной гемоперфузии через гемосорбенты в комплексной терапии пациентов с различными видами патологии.

Экспериментально доказано, что при перфузии малого объема крови (50 мл) через колонку с углеродным гемосорбентом происходят изменение клеточного состава, увеличение удельной хемилюминесценции крови, а также активация лейкоцитов, степень которой зависит от химической природы гемосорбента.

Анализ регионарного кровотока показал, что малообъемная гемоперфузия через гемосорбенты (СКТ-6А-ВЧ, Агароза-4Б) сосудистого региона задней конечности лабораторных крыс приводит к увеличению доли сердечного выброса, адресованной тканям перфузируемой конечности, и повышению в ней интенсивности микроциркуляции.

Установлено, что усиление регионарного кровотока при малообъемной гемоперфузии пораженной конечности у людей сочетается с увеличением суммарной концентрации нитратов и нитритов в венозной крови, а также с повышением концентраций эйкозаноидов, обладающих вазодилятаторными свойствами. При использовании малообъемной гемоперфузии у пациентов с термическими поражениями конечностей снижается микробная обсемененность раневой поверхности. Регионарная малообъемная гемоперфузия у пациентов с воспалительными и гнойно-некротическими заболеваниями конечностей вызывает повышение концентраций лактоферрина и миелопероксидазы, а также увеличение содержания противовоспалительных и уменьшение провоспалительных цитокинов в венозной крови.

Теоретическая и практическая значимость.

Полученные в исследовании теоретические и практические данные расширяют представления о возможных эффектах активации клеток крови при проведении перфузии через гемосорбенты. Комплексная оценка эффектов малообъемной гемоперфузии в эксперименте и клинике позволяет рассматривать активацию клеточных элементов крови при контакте с гемосорбентами как фактор, оказывающий терапевтический эффект при использовании традиционных методов эфферентной терапии. Теоретически обоснована целесообразность проведения малообъемной гемоперфузии для профилактики и коррекции микроциркуляторных нарушений при различных видах патологии.

Разработаны гемоконтактное устройство и оригинальные способы проведения малообъемной гемоперфузии сосудистых регионов людей при различных видах патологии. Доказано, что способ малообъемной гемоперфузии может быть использован в схемах терапии критической ишемии и термических травм нижних конечностей, а также воспалительных и гнойно-некротических заболеваний пальцев и кисти.

Включение регионарной малообъемной гемоперфузии через углеродный гемосорбент в комплекс стандартной терапии больных с воспалительными и гнойно-некротическими заболеваниями пальцев и кисти приводит к сокращению времени пребывания пациентов в стационаре. Использование целевой малообъемной гемоперфузии в комплексной терапии больных с критической ишемией нижних конечностей приводит к снижению числа высоких ампутаций и уменьшению летальности в отдаленные сроки.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При контакте крови с углеродным гемосорбентом СКТ-6А-ВЧ in vitro происходит изменение клеточного состава, увеличение удельной хемилюминесценции крови, а также активация лейкоцитов, степень которой зависит от химической природы используемого гемосорбента (СКТ-6А-ВЧ и Агароза-4Б).

2. При малообъемной гемоперфузии задней конечности крыс с использованием углеродного сорбента СКТ-6А-ВЧ или Агарозы-4Б наблюдаются усиление кровоснабжения перфузируемой конечности и тенденция к его увеличению в контралатеральной области.

3. Усиление регионарного кровотока при малообъемной гемоперфузии пораженной конечности у людей сочетается с увеличением суммарной концентрации нитратов и нитритов, а также с повышением концентраций метаболитов арахидоновой кислоты за счет преимущественного увеличения содержания эйкозаноидов, обладающих вазодилятационными свойствами.

4. Применение малообъемной гемоперфузии у пациентов с воспалительными и гнойно-некротическими заболеваниями конечностей приводит к усилению удельной хемилюминесценции оттекающей от пораженного региона крови, увеличению концентраций лактоферрина и миелопероксидазы, а также к изменению соотношения цитокинов в плазме крови – увеличению концентрации противовоспалительных (ИЛ-10) и уменьшению содержания провоспалительных (ИЛ-1?, ИФН-?, ФНО-? ИЛ-8) цитокинов.

5. Применение курса (4 процедуры) малообъемной гемоперфузии через СКТ-6А-ВЧ в комплексе со стандартной терапией приводит к коррекции гемодинамических нарушений в перфузируемом сосудистом регионе, улучшению ближайших и отдаленных результатов лечения больных с критической ишемией и термическими травмами нижних конечностей, а также воспалительными и гнойно-некротическими заболеваниями пальцев и кисти.

Личный вклад автора. Личное участие автора выразилось в определении основной идеи исследования, выработке методов его выполнения, непосредственном участии при выполнении экспериментального раздела, разработке на уровне изобретений способов малообъемной гемоперфузии и проведении комплексной оценки возможных механизмов их лечебного эффекта при различных видах патологии. Проведена статистическая обработка и анализ полученных результатов исследования.

Апробация работы. Международная конференция «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», 2001; Конференция «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины», СПб., 2001; Конференция «Актуальные проблемы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины» Саранск, 2001; III Всероссийская конференция «Гомеостаз и инфекционный процесс, Сочи, 2002; Международный Конгресс хирургов, Петрозаводск, 2002; Международная конференция «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге, 2002; Научно-практическая конференция «Клиническая эндокринология – достижения и перспективы», СПб., 2003; Юбилейная конференция ВМА «Актуальные проблемы хирургии сердца и сосудов, СПб., 2003; IV научно-практическая конференция хирургов СЗ России, Петрозаводск, 2003; Конференция «Механизмы типовых патологических процессов», СПб., 2003; Всероссийская конференция с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге – 2003»; XXXVI Научная конференция “Оптимизация больничной среды средствами новых технологий», СПб., 2004; Научная конференция «Методы исследования регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинике», СПб., 2004; Научная конференция «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», СПб., 2004; Научная конференция «Актуальные проблемы прикладной анатомии, оперативной и клинической хирургии», СПб., 2004; VIII Всероссийский форум «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», 2004; I Съезд амбулаторных хирургов, 2004; IX Всероссийский форум «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», 2005; I Съезд физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека», Сочи, 2005; Юбилейная международная конференция «Современные проблемы науки и образования», Москва, 2005; X Всероссийский научный форум с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге. Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии», 2006; I научно-практическая конференция ФМБА России «Актуальные вопросы профпатологии», Северодвинск, 2007; XI Всероссийский форум с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге. Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии», 2007; Международная научная конференция РАЕ, Москва, 2007; Объединенный иммунологический форум, СПб., 2008; II Съезд физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека», Кишинев, 2008; Пятый Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2009.

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы внедрены: в научные исследования ФГУП НИИ промышленной и морской медицины (Санкт-Петербург), в учебный процесс кафедры общей хирургии СПб ГМА им. И.И.Мечникова, в лечебный и преподавательский процесс С-Пб Государственного НИИ скорой помощи им. И.И.Джанелидзе, в клиническую практику хирургического отделения больницы г. Переяславль-Залесский, а также в лечебный процесс С-Пб Центра по лечению хирургических инфекций (Городская больница №14), отделения гнойной остеологии 20-2 Городской больницы Петра Великого, 3 хирургического отделения Городской больницы №3 (Санкт-Петербург).

Публикации: По материалам диссертации опубликовано 76 научных работ, в том числе 8 работ в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 285 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, из 4-х глав собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Библиография включает 417 источников, из которых 265 отечественных и 152 зарубежных. Работа иллюстрирована 11 рисунками и 48 таблицами.

Материал и методы исследования

Природа гемоконтактных препаратов

– СКТ-6А-ВЧ – угольный поливалентный, деминерализованный и дополнительно очищенный сорбент с диаметром гранул 0,5–1,0 мм (СПбМАПО).

– Агароза-4Б – четырехпроцентная поперечносшитая гранулированная крупнозернистая агароза с диаметром гранул 0,4–1,0 мм (НИИ химии АНЭР).

Эксперименты in vitro

Эксперименты in vitro выполнены с использованием проб крови здоровых доноров. Соотношение крови и гемосорбента в гемоконтактной колонке – 4:1. В колонки забирали кровь, пропуская через сорбент, и устанавливали в ротационное устройство, осуществлявшее вращение проб с постоянной скоростью. Общее время контакта крови с гемосорбентом составляло 120 мин. Через определенные промежутки времени проводили забор проб крови (пропуская через сорбент) для регистрации исследуемых показателей.

Оценка миграционной активности лейкоцитов

Постановку реакции на спонтанную миграцию осуществляли в 5 канальных капиллярах по методу А.Г.Артемовой (1973).

Лизосомально-катионный тест

Фиксацию и окраску мазков крови проводили согласно методическим рекомендациям “Лизосомально-катионный тест” [Пигаревский В.Е., 1979].

Метод люминолзависимой хемилюминесценции

Исследования спонтанной и индуцированной хемилюминесценции проводили методом люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) (LKB-Wallac 1251, Швеция). В качестве индуктора использовали опсонизированный зимозан.

Исследование клеточного состава крови

Анализ количества клеточных элементов проводили на гемоцитометре Hemoscreen-13.

Эксперименты на животных

Эксперименты выполнены на 360 нелинейных белых крысах-самцах массой 180–200 г («Рапполово» РАМН).


загрузка...