Клинико-экспериментальное обоснование применения интерлейкина-? для профилактики и терапии поражений при радиационных авариях (12.05.2009)

Автор: Тимошевский Александр Анатольевич

* – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с контролем (облучением)

Установлено также, что при обеих схемах применения ИЛ-1? способствовал более быстрому восстановлению активности ЩФ в нейтрофилах крыс, подвергавшихся фракционированному радиационному воздействию в большой дозе. Активность ЩФ у нелеченых облученных животных статистически значимо не отличалась от значений ложнооблученного контроля, начиная с 10 сут после окончания фракционированного облучения в суммарной дозе 25 Гр. В тоже время, при курсовом применении ИЛ-1? полное восстановление активности ЩФ происходило уже через 1 сут после завершения радиационного воздействия. Следует также отметить, что на 15 и 20 сут восстановительного периода активность ЩФ в нейтрофилах получавших ИЛ-1? крыс статистически значимо (p<0,05) превышала не только значения нелеченых животных, но и данные ложнооблученного контроля. В то же время, существенных различий в динамике этого показателя при различных схемах курсового применения ИЛ-1? (в ходе облучения или после его завершения) не наблюдалось.

Клинико-лабораторная оценка переносимости интерлейкина-1? людьми

Клинико-лабораторную оценку состояния здоровья людей, принимавших участие в исследовании, проводили непосредственно перед началом введения ИЛ-1?, в ходе его введения и в течение суток после окончания введения препарата. Препарат ИЛ-1?, предварительно разведенный физиологическим раствором, вводился внутривенно капельно в дозе 5 нг/кг в течение 3 часов.

В результате проведенных исследований установлено, что ИЛ-1? не вызывал существенных изменений состояния здоровья испытуемых людей, определяемых физикальными методами исследования. В то же время, через 2-2,5 ч после начала введения ИЛ-1? трое испытуемых предъявляли жалобы на озноб и головную боль, температура у них поднималась до субфебрильных значений, на 10-15% повышалось систолическое артериальное давление, частота сердечных сокращений увеличивалась до 78-80 ударов в минуту. В течение ближайших 10-15 мин после окончания введения ИЛ-1? самочувствие испытуемых людей улучшалось, жалоб на состояние здоровья они не предъявляли, показатели объективного статуса возвращались к нормальным. В целом, состояние здоровья добровольцев в ходе введения препарата и после его окончания оценивалось как удовлетворительное, а при их повторном обследовании через сутки после введения ИЛ-1? никаких отклонений изучаемых показателей от нормы ни у одного из испытуемых не отмечалось.

С целью более полного выявления реакций организма участвующих в исследовании людей на ИЛ-1? у них до введения, через 3, 6 и 24 ч после введения препарата проводилась оценка общеклинических гематологических, биохимических и иммунологических показателей.

В результате проведенных исследований установлено, что ИЛ-1? не оказывал существенного влияния на биохимические показатели сыворотки крови. Лишь активность АСТ через 6 ч и ЛДГ через 24 ч были повышены на 40% и 17%, соответственно, но и эти показатели были в пределах нормы.

В то же время, препарат обладал выраженным гемостимулирующим действием, которое проявлялось в виде повышения общего числа лейкоцитов (с максимумом через 6 ч после введения препарата), в основном, за счет увеличения количества нейтрофильных гранулоцитов, относительные величины которых составили 70-90%. Повышенный уровень общего числа лейкоцитов и нейтрофилов сохранялся и через сутки после введения ИЛ-1?.

Наряду с увеличением содержания нейтрофилов препарат стимулировал и их функциональную активность (рис. 9). После введения ИЛ-1? происходило увеличение адгезивной и миграционной способности нейтрофилов, возрастал их функциональный потенциал, определенный в НСТ-тесте, во все сроки наблюдения значительно повышались показатели хемилюминесценции. Об изменениях функционального статуса нейтрофилов свидетельствуют и сдвиги показателей метаболизма этих клеток: под влиянием ИЛ-1? повышалось содержание в клетках липидов и снижалась активность щелочной фосфатазы.

Рис. 9. Спонтанная хемилюминесценция нейтрофилов периферической крови людей в разные сроки после введения интерлейкина-1? (n = 6)

# – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с данными до введения ИЛ-1?

Иммуностимулирующее действие ИЛ-1? проявлялось ранним (через 3-6 ч после начала введения препарата) снижением абсолютного количества CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов и резким увеличением числа 0-лимфоцитов. Однако уже через 24 ч после инфузии никаких изменений количества и относительного содержания различных субпопуляций лимфоцитов не наблюдалось. Кроме того, под влиянием препарата увеличивалось число клеток, синтезирующих и продуцирующих ИЛ-1 и ФНО-? (рис. 10), а пролиферативная активность лимфоцитов, оцененная в реакции бласттрансформации с субоптимальными и оптимальными дозами ФГА и PWM, напротив, несколько снижалась.

Рис. 10. Количество мононуклеаров, синтезирующих и продуцирующих цитокины, в периферической крови людей до и после введения интерлейкина-1? (n = 6)

# – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с данными до введения ИЛ-1?

Таким образом, введение ИЛ-1( людям в дозе 5 нг/кг по субъективным (отсутствию жалоб на состояние здоровья), клиническим (показатели пульса, артериального давления, термометрии и др.) и лабораторным данным (гематологические, биохимические и иммунологические исследования) не приводило к ухудшению состояния их здоровья, но вызывало повышение общего количества лейкоцитов и стимуляцию их функционально-метаболического статуса.

Влияние интерлейкина-1( на состояние лейкоцитов людей

после облучения проб их периферической крови in vitro

Задачей данного этапа исследования явилась оценка радиозащитной эффективности ИЛ-1( в отношении количественных и функционально-метаболических показателей лейкоцитов человека, регистрирующихся после облучении проб периферической крови здоровых людей in vitro.

Для решения этой задачи, у 6 здоровых добровольцев до введения и через 3, 6 и 24 ч после начала внутривенной инфузии рекомбинантного ИЛ-1( в дозе 5 нг/кг в стеклянные пробирки забирались пробы периферической крови, которые в дальнейшем подвергались облучению в дозах 0.25, 0.5, 1 и 4 Гр in vitro. В каждой пробе до и сразу после радиационного воздействия изучалось количество основных популяций лейкоцитов, параметры субпопуляционного состава лимфоцитов и их функциональная активность в ответ на митогены, относительное число мононуклеаров, синтезирующих и продуцирующих цитокины, эффекторные свойства и морфобиохимические характеристики нейтрофилов. Сравнение полученных после введения ИЛ-1( и последующего радиационного воздействия in vitro результатов проводили с исходными данными, а также со значениями, которые регистрировались после облучения проб периферической крови этих же людей без внутривенной инфузии ИЛ-1(.

В результате проведенных на этом этапе исследований было установлено, что облучение проб периферической крови здоровых людей в дозах от 0.25 до 4 Гр in vitro не влияло на общее количество лейкоцитов, но вызывало изменения субпопуляционного состава лимфоцитов, активности процессов синтеза и продукции цитокинов мононуклеарами, а также показателей функционально-метаболического статуса нейтрофилов. Рекомбинантный ИЛ-1? в течение первых суток после его парентерального введения здоровым людям существенно изменял количественный состав и качественное состояние лейкоцитов периферической крови, разнонаправлено модифицируя реакции этих клеток, развивающиеся после облучения проб крови in vitro.

Так, при облучении проб периферической крови людей без введения им ИЛ-1( существенных изменений абсолютных количеств лейкоцитов, по отношению к исходным значениям, не наблюдалось. Если же пробы крови облучали через 6 ч после внутривенной инфузии препарата, то количество лейкоцитов в периферической крови статистически значимо (р<0,05) превышало данные, зарегистрированные при облучении проб крови у людей, обследованных до введения ИЛ-1(. Эта тенденция сохранялась и через 24 ч после начала введения препарата и последующего облучения (табл. 10).

Таблица 10

Абсолютное количество лейкоцитов людей до и после введения интерлейкина-1( и последующего облучения проб периферической крови в дозах 0.25, 0.5, 1 и 4 Гр in vitro, х 109 /л (n = 6)

Доза облучения, Гр До введения ИЛ-1( Сроки исследования после введения ИЛ-1(, ч

3 6 24

Без облучения 4,5 ( 1,48 4,8 ( 1,7 11 ( 2,11 # 7,25 ( 2,9

0.25 4,2 ( 1,1 4,7 ( 1,0 12 ( 1,1 # 6,3 ( 2,0

0.5 3,7 ( 1,2 6,0 ( 1,3 11 ( 2,6 # 6,2 ( 0,7

1 4,6 ( 1,6 4,9 ( 1,3 8,6 ( 2,1 # 5,9 ( 0,6

4 3,6 ( 0,7 4,6 ( 1.1 9,1 ( 2,4 # 6,5 ( 2,8

# – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с данными до введения ИЛ-1(

При оценке показателей лейкоцитарной формулы было выявлено, что, на фоне отсутствия сдвигов в распределении лейкоцитов после облучения проб крови in vitro, введение ИЛ-1( сопровождалось значительным ростом относительного содержания нейтрофильных гранулоцитов, в том числе и за счет увеличения юных и палочкоядерных форм клеток. Это приводило к тому, что через 6 и 24 ч после инфузии препарата и последующего радиационного воздействия относительное содержание нейтрофилов статистически значимо (р<0,05) превышало показатели, зарегистрированные у людей как в исходном состоянии, так и после облучения проб крови in vitro без введения ИЛ-1(.

Профилактическое введение испытуемым ИЛ-1( до облучения проб их периферической крови приводило также к изменению показателей, характеризующих функционально-метаболический статус нейтрофилов. Так, при радиационном воздействии in vitro в дозах 0.25, 0.5, 1 и 4 Гр, которое проводилось через 3 ч после начала внутривенной инфузии ИЛ-1(, содержание липидов в нейтрофилах достоверно (р<0,05) возрастало. Если же облучение проб крови осуществлялось спустя 6 или 24 ч после введения препарата, уровень внутриклеточных жиров в гранулоцитах практически не изменялся.

Применение ИЛ-1( за 3 или 6 ч до облучения проб крови людей не отменяло постлучевого уменьшения содержания катионных белков в нейтрофилах. В то же время, эффективность ИЛ-1(, введенного испытуемым за 24 ч до облучения проб их периферической крови в дозах 1 и 4 Гр, была значительной, о чем свидетельствует более высокий уровень катионных белков (115–120%) по отношению к их содержанию в нейтрофилах проб крови, облученных без предварительного введения препарата.

Профилактическое применение ИЛ-1( до облучения проб крови людей не отменяло постлучевого ингибирования щелочной фосфатазы. Однако снижение активности данного фермента после радиационного воздействия in vitro в дозах 1 и 4 Гр на фоне введенного препарата было меньшим (р<0,05), чем в пробах крови, которые подвергались облучению без введения ИЛ-1( (табл. 11).

Таблица 11

Активность щелочной фосфатазы в нейтрофилах людей до и после введения интерлейкина-1( и последующего облучения проб периферической крови в дозах 0.25, 0.5, 1 и 4 Гр in vitro, усл. ед. (n = 6)

Доза облучения, Гр До введения ИЛ-1( Сроки исследования после введения ИЛ-1(, ч

3 6 24

Без облучения 1,31(0,06 0 ,99 ( 0,05 # 1,06 ( 0,04 # 1,08 ( 0,08 #


загрузка...