Кистозная патология яичников у коров и совершенствование методов её дифференциальной диагностики и терапии (08.09.2008)

Автор: Дюльгер Георгий Петрович

Показано, что кистозная болезнь яичников является мультифакторной дисгормональной патологией, клинически проявляющейся в безрецидивной, эпизодически рецидивирующей и хронической формах. К возникновению данной патологии предрасполагают порода, стойловый период содержания, количество, продолжительность предшествовавшей и стадия текущей лактации, отягощенный акушерский анамнез, воспалительные процессы в матке, безрезультатные осеменения и пропуски половых циклов. Впервые определена высокая информативность ультразвуковых исследований для визуальной оценки кистозного образования, дифференциальной диагностики фолликулярных и лютеиновых кист яичников, кистозных желтых тел и мониторинга клинического течения болезни и ранней оценки эффективности проводимой терапии.

Выявлена терапевтическая эффективность агониста ГнРГ и ПгФ2? при фолликулярных и лютеиновых кистах яичников, хорионического гонадотропина – при рецидивирующей форме кистозной болезни яичников. Дано научное обоснование и доказана целесообразность использования самцов-пробников для коррекции половой функции коров с кистами яичников.

Получены три патента РФ по радиотелеметрическому определению времени осеменения коров и телок с использованием быка-пробника или коровы-выявительницы (№ 44495, Бюл. №9, 27.03.2005; № 46427, Бюл. №19, 10.07.2005; № 57110, Бюл. №28, 10.10.2006).

1.4. Практическая значимость. Показана роль воспалительных процессов в гениталиях коров в генезе нарушений функциональной деятельности яичников и развитии кист яичников. Разработаны и предложены производству комплексные клинико-эхографические методы диагностики и дифференциальной диагностики кистозных образований в яичниках. Дана оценка эффективности и рекомендованы дифференцированные методы гормональной терапии коров под контролем УЗИ, а также метод профилактики рецидива кист яичников с использованием хорионического гонадотропина. Обоснован метод коррекции функциональной деятельности яичников при кистозной патологии и ее профилактики путем использования вазэктомированного самца-пробника.

1.5. Апробация и реализация результатов исследований. Материалы исследований доложены и одобрены на научных конференциях РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева (1986-1992, 2004-2006 гг.), на международных научно-практических конференциях «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных» (Дубровицы, ВНИИЖ, 2007), «Агротехнологии ХХ1 века» (М., РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, 2007), включены в учебники для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальностям «Ветеринария» и «Зоотехния»: «Ветеринарное акушерство и гинекология» (М., 1986), «Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения» (М., 1999, 2000), «Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных» (М., 2005), в справочные пособия для студентов зооинженерного и ветеринарно-санитарного факультетов: «Лекарственные средства, применяемые в ветеринарном акушерстве, гинекологии и современных репродуктивных технологиях» (М., 2002, 2003), «Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения у коров и телок», рассмотренные и одобренные Бюро Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии 1 июня 2005 (протокол N3).

1.6. Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 27 научных работах, в том числе 17 в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

1.7. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 232

страницах компьютерного набора. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов и практических предложений, списка литературы, включающего 397 источника, из которых 302 иностранных. Диссертация содержит 38 таблиц и 48 рисунков.

1.8. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Степень распространения и факторы риска развития кист яичников у коров.

2. Морфофункциональная, эндокринологическая и клинико-эхографическая характеристика кист яичников у коров и их дифференциальная диагностика.

3. Особенности кистогенеза, формы проявления кистозной болезни и нарушений половой функции коров.

4. Эффективность гормональной терапии коров с кистами яичников под контролем УЗИ.

5. Методы коррекции функциональной деятельности яичников и профилактики рецидива кист c использованием хорионического гонадотропина и самца-пробника.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 1984…2007 гг. в учхозах ТСХА «Михайловское» Московской области, имени Калинина Тамбовской области, ЗАО Агрофирма «Подмосковное» Московской области, на кафедре зоогигиены, акушерства и ветеринарии ФГОУ ВПО «Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А. Тимирязева».

Основные этапы исследований и количество обследованных животных приведены на рис.1.

Для определения частоты распространения и факторов риска развития кистозной болезни на 4-х молочно-товарных фермах в среднем через каждые 40 дней в течение года проводили трансректальную пальпацию яичников и матки бесплодных коров, а также коров на 15…30-й день после родов, с изучением данных зоотехнической и ветеринарной документации. При этом учитывали породу, количество и продолжительность предшествовавшей лактации, уровень молочной продуктивности (по последней законченной лактации в пересчете на 4%-ю жирность молока), течение последней беременности, родового и послеродового периодов и сроки осеменения животных.

Диагноз на кисты яичников устанавливали по данным 2…3-кратного трансректального исследования с 4-дн перерывами, при обнаружении в одном или обоих яичниках одного или нескольких шаровидных флюктуирующих образований диаметром более 2 см при отсутствии желтого тела.

У отдельных коров с кистами яичников в стойловый (n=15) и пастбищный (n=11) периоды содержания брали пробы крови из яремной вены для биохимического исследования, которые выполняли в Подольской районной ветеринарной лаборатории.

Рис.1. Основные этапы исследований и количество обследованных животных

Для получения послеубойного материала и исследования морфофункциональных особенностей овариальных кист яичников и преовуляторных фолликулов провели убой 16 бесплодных коров с кистами яичников и 4 здоровых самок в период половой охоты. Непосредственно перед убоем у 13 кистозных и 4 здоровых животных получали кровь в пробирки с гепарином для гормонального исследования. Пробы крови центрифугировали в течение 30 мин при скорости 3000 об/мин. Полученную плазму после центрифугирования замораживали и хранили при температуре - 15°С до момента исследования.

После убоя извлекали и тщательно осматривали половые органы животных. Яичники отделяли от окружающих тканей, затем измеряли, взвешивали и зарисовывали, учитывая местоположение, количество кист, их диаметр и толщину стенки, наличие или отсутствие пристеночной лютеиновой ткани, характер ее распределения. По данным динамического клинического наблюдения за параметрами кистогенеза определяли также возраст кист яичников. Регистрировали расположение и количество крупных пузырчатых фолликулов размером 11…20 мм.

Для гормонального исследования аспирировали при помощи тонкой иглы содержимое крупных (размером 11…20 мм) и кистозных фолликулов (размером более 20 мм) в объеме до 1…2 мл. Полученные пробы фолликулярной и кистозной жидкости центрифугировали, маркировали и хранили в замороженном состоянии.

В плазме крови определяли концентрацию прогестерона, в фолликулярной и кистозной жидкости – прогестерона и 17?-эстрадиола.

Концентрацию гормонов измеряли методом радиоиммунологического анализа (РИА) с использованием высокоспецифической антисыворотки и меченого гормона. Радиоактивность измеряли сцинтилляционным счетчиком, а концентрацию гормона высчитывали по стандартной калибровочной кривой.

Для гистоанализа отбирали кусочки овариальной ткани с кистами и крупными пузырчатыми фолликулами. Пробы фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, обезвоживали в спирте возрастающей концентрации и заливали целлоидином. На санном микротоме изготавливали срезы толщиной 8…10 мкм. Полученные гистосрезы окрашивали гематоксилин-эозином и изучали под микроскопом.

Послеубойные заключения о морфотипе выявленных кист яичников использовали в качестве эталона точности для оценки диагностических возможностей трансректальной пальпации и однократного измерения концентрации прогестерона в крови.

При проведении трансректальной пальпации тонкостенные кисты с отчетливо флюктуирующей стенкой определяли как фолликулярные, толстостенные кисты с едва флюктуирующей стенкой – как лютеиновые.

При установлении лабораторного диагноза кисты у коров с концентрацией прогестерона в плазме периферической крови выше 1 нг/мл относили к лютеиновым, а с концентрацией ниже 1 нг/мл – к фолликулярным.

Для определения особенностей кистогенеза и клинического проявления кистозной болезни яичников на протяжении не менее 2 мес с момента постановки первичного диагноза за 65 коровами черно-пестрой (n=41) и айрширской (n=24) пород вели динамическое наблюдение. Клинический мониторинг включал в себе ежедневный осмотр наружных половых органов, визуальное наблюдение за половым поведением коров на выгульной площадке (утром и вечером по 30 мин) и трансректальную пальпацию яичников - через каждые 3...5 дней.

У 3 здоровых коров и 7 с рецидивирующей формой кистозной болезни яичников параллельно с клиническим мониторингом проводили динамическое наблюдение за уровнем прогестерона в плазме периферической крови. Пробы крови от коров с кистами яичников для гормонального анализа получали из яремной вены через каждые 3…5 дней на протяжении 34…66 дней.

Для оценки терапевтической эффективности биостимуляции при кистозной болезни яичников были сформированы две группы животных по 13 голов в каждой. В первой группе животные, начиная со следующего дня после обнаружения кист яичников, общались с вазэктомированными быками-пробниками (2 раза в день по 1…1,5 ч), во второй – не контактировали с быками-пробниками и служили контролем.

Для стимуляции овуляции 12 коровам с рецидивирующей формой кистозной болезни яичников применяли хорионический гонадотропин внутривенно в дозе 5000 ЕД. Препарат вводили коровам в начале нового кистозного цикла: в период манифестации признаков половой охоты или же формирования кисты. Время начала кистозного цикла определяли по данным визуального наблюдения за половым поведением животных в загоне (утром и вечером по 30 мин) и данным динамического наблюдения за параметрами кистогенеза (трансректальную пальпацию яичников проводили в среднем через каждые 4 дня). Параллельно с клиническим мониторингом у 3 коров брали кровь из яремной вены для измерения уровня прогестерона на 0, 4, 8 и 12 сут после применения ХГч. О клинической эффективности проведенной гормонотерапии судили по частоте и срокам восстановления овуляции и плодовитости, а также по индексу оплодотворяемости.

На молочно-товарной ферме ЗАО Агрофирма «Подмосковное» для уточнения ранее вынесенного клинического диагноза на овариальные кисты проводили трансректальное ультразвуковое исследование (УЗИ) яичников 55 высокопродуктивных коров разного возраста и с разными сроками бесплодия.

Инструментальную диагностику кист яичников осуществляли при помощи ультразвукового диагностического прибора LOGIQ ? 100 MP, оснащенного линейным ректальным датчиком с частотой 5 МГц.

Ультразвуковое сканирование яичников проводили двукратно с перерывом 4…11 дней. За кисты яичников принимали анэхогенные образования диаметром более 20 мм при отсутствии при первом и втором исследовании желтого тела. При вынесении окончательного диагноза уточняли количество, локализацию, размеры выявленных кистозных фолликулов и их морфотип (по наличию/отсутствию пристеночной лютеиновой ткани).

УЗИ использовали также для проведения дифференцированной гормонотерапии коров с кистами яичников и оценки ее эффективности. Для коррекции половой функции коровам с фолликулярными кистами яичников применяли сурфагон, с лютеиновыми кистами – магэстрофан. Препараты применяли внутримышечно однократно или двукратно (по клинической ситуации): сурфагон в дозе 5 мл, магэстрофан – 2 мл. Эффективность проведенной гормонотерапии определяли в сравнении с контрольными группами.

Все полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики на персональном компьютере с использованием программы «Microsoft Excel». Для оценки достоверности полученных результатов использовали тест Стьюдента, различия между полученными данными считали достоверными при P ? 0,05.


загрузка...