Взаимодействие структур врожденного и адаптивного иммунитета в пораженной коже больных тяжелыми формами псориаза на фоне системной антицитокиновой терапии (иммуноморфологическое исследование) (07.12.2011)

Автор: Катунина Оксана Рахимовна

Примечание: пол и возраст указаны в абсолютных частотах, остальные показатели в виде медиан и интерквартильных отрезков. Уровень статистической значимости при сравнении групп по клиническим показателям Р>0,05 (U-тест Манна-Уитни).

Результаты исследования

Результаты гистологического исследования показали характерные для заболевания патологические признаки: акантоз эпидермиса, нарушение дифференцировки кератиноцитов в виде паракератоза, наличие микроабсцессов Мунро внутри паракератотических чешуек, густая периваскулярная инфильтрация в дерме преимущественно из лимфоцитов и гистиоцитов, в биоптатах полученных из очагов пораженной кожи до начала лечения.

Изучение распределения и содержания толл - подобных рецепторов 2, 4 и 9 (TLR2, TLR4 и TLR9), антигенпрезентирующих клеток Лангерганса (CD1a), распределения провоспалительных цитокинов ИЛ-1? и ФНО-?, молекул межклеточной адгезии ICAM-1 и Е-селектина, субпопуляций Т-лимфоцитов проводилось до начала лечения у 30 больных псориазом (12 женщин и 18 мужчин) и у 10 здоровых добровольцев. Возраст больных варьировал от 19 до 68 лет, длительность заболевания от 3 до 35 лет. Величина индекса PASI колебалась от 10 до 65,4 баллов. Группы больных и здоровых не отличались по полу и возрасту (соответственно Р = 0,172 и Р = 0,249).

Результаты иммуноморфологического исследования выявили экспрессию толл-подобных рецепторов TLR2 и TLR4 в базальном и шиповатом слоях эпидермиса в очагах поражения у больных псориазом до начала лечения. В роговом слое и в зонах паракератоза экспрессия толл-подобных рецепторов TLR2 и TLR4 отсутствовала. В верхних рядах шиповатого слоя эпидермиса было отмечено усиление интенсивности иммуногистохимической окраски. Площадь экспрессии TLR2 и TLR 4 в эпидермисе на отрезке длиной 0,5 мм была достоверно повышена до 990,2 мкм? [817,7/1099,2] и 968,5 мкм? [750,5/1093,6] соответственно. В дерме экспрессия TLR2 и TLR 4 наблюдалась на эндотелии кровеносных сосудов, клетках макрофагального и гистиоцитарного ряда воспалительных инфильтратов, на эпителиоцитах потовых желез и наружного корневого влагалища волосяных фолликулов. Площадь сосудов с положительной экспрессией TLR2 и TLR4 была повышена до 7,1% [5,3/9,1] и 8,2% [5,7/10,4] соответственно.

В биоптатах кожи, полученных от здоровых лиц, экспрессия TLR2 и TLR4 обнаруживалась в базальном, шиповатом и зернистом слоях эпидермиса, в роговом слое - отсутствовала. Окраска была выражена равномерно, без тенденции к усилению интенсивности в каком-либо слое эпидермиса. Площадь экспрессии TLR2 в эпидермисе у здоровых лиц на отрезке 0,5 мм составляла 213,2 мкм? [191,3/223,0], TLR 4 – 217,3 мкм? [191,5/222,9]. В дерме у здоровых лиц экспрессия TLR2 и TLR4 отмечалась на эндотелии кровеносных сосудов, клетках макрофагального и гистиоцитарного ряда, располагающихся вокруг сосудов сосочкового слоя дермы, на эпителиоцитах потовых желез и наружного корневого влагалища волосяных фолликулов. Площадь сосудов с положительной экспрессией TLR2 и TLR4 у здоровых лиц составила 2,5% [1,9/3,3] и 2,3% [1,9/2,4] соответственно.

Реакция с моноклональными антителами к TLR9 была отрицательной в эпидермисе и дерме, как у больных псориазом, так и у здоровых лиц. Для подтверждения полученных результатов была проведена постановка иммуногистохимической реакции с поликлональными антителами к TLR9 в ткани небной миндалины, где положительная экспрессия изучаемого маркера наблюдалась на криптальном эпителии, на эндотелии кровеносных сосудов, клетках макрофагального и гистиоцитарного ряда, инфильтрирующих ткань миндалины.

Другой компонент врожденного иммунитета - клетки Лангерганса (CD1a+) в очагах пораженной кожи больных псориазом обнаруживались в базальном и шиповатом слоях эпидермиса, имели тело и несколько четко выраженных отростков, контактирующих с прилегающими кератиноцитами. В дерме клетки Лангерганса присутствовали в составе периваскулярных инфильтратов и не имели четко выраженной отросчатой формы. Количество клеток Лангерганса у больных псориазом было статистически достоверно выше по сравнению с показателями здоровых лиц, как в эпидермисе, так и в дерме, и составляло 30,2 [25,6/37,0]/0,5 мм и 40,3[27,2/47,6]/0,15 мм2 соответственно. У здоровых лиц клетки Лангерганса локализовались в эпидермисе на уровне базального слоя, имели отросчатую форму. В дерме обнаруживались единичные клетки Лангерганса, располагающиеся вокруг сосудов сосочкового слоя, не имеющие отростков. Их количество в эпидермисе здоровых составило 12,5 [11,4/14,0]/0,5 мм, в дерме 6,2 [4,6/8,0]/0,15 мм2.

Таким образом, в коже больных псориазом происходит повышение экспрессии толл-подобных рецепторов TLR2 и TLR4 (табл. 3) и увеличение числа антигенпрезентирующих клеток - клеток Лангерганса, относящихся к структурам врожденного иммунитета.

Статистически значимое повышение содержания клеток Лангерганса (CD1a+) в эпидермисе и дерме больных псориазом наряду с повышенным количеством толл-подобных рецепторов 2 и 4 свидетельствует об их активации для процессинга и готовности к миграции в регионарные лимфатические узлы для презентации Т-лимфоцитам пока еще неустановленного антигена. В дальнейшем это приводит к развитию иммунного воспаления.

Полученные результаты позволяют полагать, что отсутствие экспрессии толл-подобного рецептора 9 (TLR9), ответственного за распознавание вирусных частиц, у здоровых лиц и больных псориазом свидетельствует о том, что данный рецептор, вероятно, имеет меньшую значимость для инициации иммунных реакций в коже, в отличие от других тканей.

Таблица 3. Содержание толл-подобных рецепторов и клеток Лангерганса

в пораженной коже больных псориазом и у здоровых добровольцев

показатель

больные псориазом

(n=30) здоровые добровольцы (n=10) Р1

TLR2 Э 3 (мкм2) 990,2 [817,7/1099,2]2 213,2[191,3/223,0] < 0,001

TLR2 Д 4 (%) 7,1 [5,3/9,1] 2,5 [1,9/3,3] < 0,001

TLR4 Э (мкм2) 968,5 [750,5/1093,6] 217,3 [191,5/222,9] < 0,001

TLR4 Д (%) 8,2 [5,7/10,4] 2,3 [1,9/2,4] < 0,001

CD1a+ Э

(абс. к-во/0,5мм) 30,2 [25,6/37,0] 12,5 [11,4/14,0] < 0,001

CD1a+ Д

(абс. к-во/0,15мм2) 40,3 [27,2/47,6] 6,2 [4,6/8,0] < 0,001

Примечание:

1Р - уровень статистической значимости при сравнении показателей больных псориазом и здоровых добровольцев

2 медиана значений, в скобках приведены границы интерквартильных отрезков

3Э - эпидермис, 4Д - дерма.

Экспрессия провоспалительного цитокина ИЛ-1? в пораженной коже больных псориазом выявлялась в базальном и шиповатом слоях эпидермиса, в шиповатом слое была выражена наиболее интенсивно, отсутствовала в паракератотическом и роговом слоях. Площадь экспрессии ИЛ-1? в эпидермисе на отрезке длиной 0,5 мм была достоверно повышена до 957,5 мкм? [821,6/1084,5] (Р<0,001).

В дерме экспрессия ИЛ-1? наблюдалась на эндотелии кровеносных сосудов, клетках воспалительных инфильтратов. Для оценки содержания ИЛ-1? в дерме осуществлялся подсчет площади сосудов, на эндотелии которых обнаруживалась экспрессия исследуемого маркера, которая затем выражалась в процентах по отношению к площади поля зрения. Изучение этого показателя выявило достоверное повышение площади сосудов с положительной экспрессией ИЛ-1? до 8,5% [6,1/10,7] (Р<0,001) (табл. 4).

В биоптатах кожи, полученных от здоровых лиц, экспрессия ИЛ-1? в эпидермисе была выражена очень слабо, на эндотелии сосудов дермы отсутствовала, выявлялись единичные позитивно окрашенные клетки, локализованные вокруг сосудов поверхностного сплетения.

Таблица 4. Содержание провоспалительных цитокинов ИЛ-1? и ФНО-?

в пораженной коже больных псориазом и у здоровых лиц

показатель

больные псориазом (n=30) здоровые добровольцы (n=10) Р1

ИЛ-1? Э 3 (мкм2) 957,5 [821,6/1084,5] 0 < 0,001

ИЛ-1? Д 4 (%) 8,5 [6,1/10,7] 0 < 0,001

ФНО-? Э (мкм2) 0 0 -

ФНО-? Д (%) 0 0 -

Примечание:


загрузка...