Диагностическое значение лабораторных параметров при зобной эндемии у различных этнических групп юго-западной Сибири (07.09.2009)

Автор: Аппельганс Татьяна Викторовна

Структура обследованного населения

Население Теленгиты Алтай-кижи Славяне

ДНЗ 66 89 86

АИТ 53 55 95

ДТЗ – – 28

Диффузно-узловые формы – – 314

Контроль 27 31 44

Всего 146 175 566

Общее количество обследованных – 887 человек

Лабораторные методы исследования

Функциональная оценка ЩЖ проводилась по уровню тиреотропного гормона и гормонов ЩЖ – свободного и общего тироксина (Т4), общего трийодтиронина (Т3) иммуноферментыми методами (Вектор-Бест, Россия). Гемограмма оценивалась стандартными рутинными методами с подсчётом лейкоцитарной формулы, количества тромбоцитов и ретикулоцитов. Исходный уровень метаболизма гранулоцитов периферической крови определялся по уровню миелоидной пероксидазы, щелочной фосфатазы, гликогена и содержанию катионно-лизосомальных белков (Кост Е.А., 1975; Меньшиков В.В., 1987). Параметры феррокинетики оценивались по уровню сывороточного железа, общей железосвязывающей способности (ОЖСС), латентной железосвязывающей способности (ЛЖСС), коэффициенту насыщения трансферрина (КНТ) феррозиновым методом с использованием диагностических наборов фирмы «Teco» (США) на анализаторе ФП-901 «Labsystems» (Финляндия), и белков, принимающих участие в феррокинетике – гаптоглобина и лактоферрина. Определение концентрации лактоферрина (ЛФ) в сыворотке крови производилось твердофазным иммуноферментным методом на тест-системах «Лактоферрин – стрип» (Вектор-Бест, Новосибирск, Россия) по инструкции изготовителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на микропланшетном ридере «Bio-Rad Model 3550-UV» (Bio-Rad Lab., США). Уровень гаптоглобина (ГБ) определяли иммунотурбидиметрическим методом с использованием моноспецифических кроличьих антисывороток против данного белка (Зорин Н.А. и соавт., 1992). Гуморальный иммунитет оценивался по концентрации общих иммуноглобулинов основных классов (G, A, M) методом радиальной иммунодиффузии в геле, также определялось количество специфических антител к тиреоглобулину и тиреопероксидазе иммуноферментным методом фирмы ЗАО «Алкор-БИО» (Россия). Дополнительно определялись первичные антитела к тиреоглобулину класса IgМ, и вторичные антитела класса IgG методом ИФА при помощи твёрдофазного иммуноферментного анализа в нашей модификации. В лунки полистероловых планшет вносили раствор высокоочищенного препарата тиреоглобулина в концентрации 10 мкг/мл, полученного с помощью рециклической гель – хроматографии. Сыворотку крови обследуемых пациентов разводили в 50 раз забуференным физиологическим раствором (рН 7,2). Для проявления тиреоглобулиновых АТ использовали коньюгат кроличьих антител против Fc-фрагмента Ig G или Ig М, меченные пероксидазой хрена. Для расчета конечной концентрации аутоантител строили калибровочный график, где Ig G или Ig М с известной концентрацией иммобилизировался на аффинно очищенные кроличьи антитела против Fc-фрагмента Ig G. Конечные результаты выражали в мкг/мл. Концентрацию ?2-макроглобулина (МАГ) и ассоциированного с беременностью ?2-гликопротеина (ПАГ) в сыворотке крови определяли методом низковольтного ракетного иммуноэлектрофореза с использованием моноспецифических антисывороток против данного белка (Вееке Б., 1977; Зорин Н.А. и соавт., 1992).

Для определения большей части общепринятых биохимических показателей использовали наборы фирмы «Spinreact» (Испания) на полуавтоматическом биохимического анализатора STAT-FAX 1904+, с проточной кюветой Mosquito (Awareness Technology Іnk., США). Сывороточные регуляторные пептиды ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-?, ИФН-? определяли наборами фирм «Протеиновый контур» и «Вектор- Бест» (Россия).

Цитологическое исследование тонкоигольной аспирационной биопсии и интраоперационного материала проводили на световом микроскопе Micros-50 (Австрия) с сухой и масляной иммерсией при увеличении 10 х 20 и 10 х 100. Окраску препаратов проводили азур-эозиновыми красителями адаптированным нами методом экспресс-окраски, позволяющим получать хорошее качество окрашенных препаратов в течение 3 минут. Препараты фиксировали красителем Лейшмана (1 минута), а затем в течение 2 минут докрашивали концентрированным раствором красителя Романовского.

Статистическая обработка. Выбор центральных характеристик исследуемых количественных данных осуществляли после изучения формы их распределения. Оценку различия от распределения Гаусса проводили по критерию согласия Колмогорова-Смирнова. Рассчитывали среднее значение показателя и его 95% и 75% доверительные границы, ошибку среднего, а также медианы и 25%-75% пределы колебаний значений. Рассчитывали абсолютные и относительные частоты качественных признаков. Оценку различий частот проводили непараметрическим критерием ?2, а при нормальном распределении – критерием Стьюдента. При проверке гипотез различия считались достоверными при достигнутом уровне значимости р<0,05. При корреляционном анализе рассчитывали коэффициенты корреляции Пирсона и Спирмена, а также значимость их отличий от нуля. Диагностическая информативность лабораторных тестов оценивалась методом бинарной логистической регрессии с графическим отображением данных в виде ROC кривых (receiver-operator characteristic curve). На ROC кривых по оси ординат обозначена частота истинно положительных результатов (чувствительность), по оси абсцисс – частота ложноположительных результатов (1 минус специфичность) по всему диапазону точек разделения. Значения по осям соответствуют вероятностям от 0 до 1 (от 0 до 100%). Для чувствительных тестов площадь ROC кривой приближается к 0 или 100%, тогда как для нечувствительных – к 50%.

Для выявления степени значимости лабораторных тестов использована бинарная логистическая регрессия с функцией последовательного исключения или включения признаков и оценки вклада каждого лабораторного параметра в распознавании заданного образа в парных группах «опыт» – «контроль».

При выборе статистических процедур учитывались методологические требования Международного конгресса по гармонизации GGP «Статистические принципы для клинических исследований», (ICH Guidelines // Good Clin. Pract. J. – 1998. – Vol.5, №4. – P.27-37). Статистическая обработка данных проводилась с помощью программ SPSS 15.0. и STATISTICA 6.0.

Результаты собственных данных и их обсуждение

При нарушениях в эндокринной системе изменяются все обменные процессы организма как первично, так и вследствие адаптационно-приспо-собительных механизмов, позволяющих выжить организму в экстремальных условиях. Особенно эти изменения проявляются при сочетанных нарушениях иммунитета и эндокринного баланса согласно концепции о действии целостной регуляторной иммунно-эндокринной системы (Акмаев И.Г., 1999; Симбирцев А.С., 2004; Учакина О.Н., 2007).

У практически здоровых теленгитов выявлено снижение данных общего Т4 в сыворотке крови в 1,78 раз по сравнению со здоровыми алтай-кижи и в 1,75 раз ниже по сравнению с жителями Кузбасса (табл. 3).

Таблица 3

Уровень гипофизарно-тиреоидных гормонов

(M(m, медианы, 25%-75% пределы колебаний)

Гормоны Высокогорный

Алтай Низкогорный

Алтай Южный Кузбасс

теленгиты n=27 Медианы – пределы колебаний алтай-кижи n=32 Медианы – пределы колебаний славяне

n=44 Медианы –

пределы

колебаний

мМе/мл 2,08±0,33 2,05

(1,3-2,8) 1,80±0,30 2,20

(1,3-3,1) 1,62±0,42 1,9

(1,2-2,6)

Общий Т3, нмоль/л 2,17±0,20 1,6

(1,2-2,0) 2,27±0,25 2,17

(1,64-2,7) 1,64±0,56 1,8

(1,5-2,1)

Общий Т4, нмоль/л 67,03±3,20 69,0

(58,0-80,0) 114,03±5,25* 107,5

(92,0-123,0) 117,6±4,25** 109,4


загрузка...