Методологические основы определения солей тяжелых металлов в кормах и биологических жидкостях организма и профилактика их токсического влияния на животных (03.10.2011)

Автор: Миронов Николай Андреевич

Пипетки 1-1-1; 1-1-2; 1-1-5; 1-1-10 по ГОСТ 25336-82.

Цилиндры мерные вместимостью 10, 25, 100 и 1000 см3 по ГОСТ 1770-74.

Спирт этиловый ректификат ГОСТ 5962-67.

Калий бромистый ГОСТ 4160-65, х.ч.

Гидразин сернокислый ГОСТ 5841-65, ч.д.а.

Аммоний молибденовокислый ГОСТ 3765-6, х.ч.

Фенолфталеин ГОСТ 5850-72 ч.д.а.

Кислота соляная ГОСТ 3118-77, х.ч.

Кислота серная ГОСТ 4204-77, х.ч.

Кислота азотная ГОСТ 4461-77, х.ч.

Кислота хлорная по ТУ 6-09-2887-73 ч.

Натрия гидроокись ГОСТ 4328-77, ч.д.а.

Калий йодистый ГОСТ 4432-74, х.ч.

Перекись водорода (пергидроль) ГОСТ 10926-76, х.ч.

Ангидрид мышьяковистый ГОСТ 1973-77, х.ч.

Натрий мышьяковистый двузамещенный, 7-водный или стандарт-титр.

Допускается применять импортное оборудование, посуду и реактивы с техническими характеристиками не ниже отечественных аналогов.

Подготовка к испытанию

4.1. Минерализация

Способ основан на полном разрушении органических веществ (гидролизных дрожжей, БВК) при нагревании с серной и азотной (концентрированными) кислотами с добавлением хлорной кислоты.

4.2. Подготовка к минерализации

4.2.1. Стеклянную посуду после обычной мойки дополнительно промывают раствором азотной кислоты, ополаскивают водопроводной, а затем дистиллированной водой.

4.2.2. Навеску гидролизных дрожжей, БВК взвешивают в стакане и переносят в колбу Къельдаля, стараясь не попасть на стенки колбы.

4.2.3. В колбу Къельдаля с навеской пробы, подготовленной по пп. 4.2.1., 4.2.2., вносят по 10 мл серной и азотной кислоты и выдерживают в течение 12 часов (лучше оставить на ночь).

4.2.4. Колбу Къельдаля медленно нагревают на электроплитке в течение 2-х часов, избегая бурной реакции.

После прекращения выделения бурых паров азотной кислоты колбу вынимают, ставят на 20–30 минут для охлаждения и затем добавляют 10 мл азотной кислоты с последующим постепенным нагреванием. Как только жидкость начнет кипеть, температуру накала электроплитки увеличивают до максимума и продолжают озолять до исчезновения бурых паров азотной кислоты. Затем колбу вынимают, дают остыть содержимому и после этого приливают еще 10 мл азотной кислоты и продолжают постепенно нагревать.

После исчезновения бурых паров азотной кислоты колбу вынимают, дают остыть и в центр жидкости приливают 1 мл хлорной кислоты с последующим нагреванием. Озоление проводят до полного обесцвечивания жидкости. Хлорную кислоту добавляют по мере необходимости. Всего за период озоления пробы расходуется до 5 мл хлорной кислоты.

4.2.5. После обесцвечивания содержимого колбу вынимают, охлаждают, добавляют 5 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония и нагревают до испарения раствора и выделения белых паров серной кислоты, затем охлаждают. После охлаждения стенки колбы обмывают дистиллированной водой и нагревают до удаления ее паров. Готовый раствор в колбе должен быть бесцветным или соломенно-желтого цвета.

4.2.6. Контрольную пробу готовят, используя те же реактивы, в тех же количествах и последовательности, как и при минерализации пробы, но вместо пробы приливают адекватное количество дистиллированной воды.

4.3. Подготовка прибора для отгонки и поглощения мышьяка

Прибор собирают в соответствии с рисунком. Прибор состоит из реакционной (отгонной) колбы вместимостью 150 мл, соединительной трубки со шлифом 24/29 и капилляром на одном конце, доходящим до дна отгонной колбы, а на другом конце имеется каплеуловитель и воронка с притертым краном. Каплеуловитель соединяется с холодильником. Колба-приемник и колба-ловушка соединяются между собой и холодильником. Перед использованием прибор следует промыть азотной кислотой (1:1), затем тщательно промыть водой.

4.4. Приготовление молибденовокислого аммония

4.4.1. Для перекристаллизации молибденовокислого аммония берут 200 г последнего и тщательно взбалтывают с 300 мл бидистиллированной воды, нагретой до 70–80°C. Нерастворившийся осадок отфильтровывают и отбрасывают. К фильтрату добавляют 1/3 по объему абсолютного этилового спирта. Выпавший мелкокристаллический осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывая 5–6 раз по 80–100 мл абсолютного этилового спирта, и высушивают в эксикаторе.

4.4.2. Растворяют 1 г перекристаллизованного молибдата аммония, не содержащего фосфора, в 45 мл теплой 6 н. серной кислоты. После охлаждения раствора объём доводят до 100 мл 6 н. серной кислотой. Раствор хранят в плотно закрытой посуде (устойчив в течение месяца).

4.5. Приготовление основного раствора мышьяка

Основной раствор мышьяка готовят одним из способов:

а) используют стандарт-титр или берут навеску 0,264 г мышьяковистого ангидрида (As2O3) растворяют в 10 мл 10%-ного раствора едкого натра с последующей нейтрализацией серной кислоты (1:1) и после этого раствор количественно переносят в мерную колбу на 1000 мл, куда добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты и доводят объем до метки дистиллированной водой; в 1 мл основного раствора содержится 20 мкг мышьяка;

б) используют стандарт-титр или берут навеску 0,8320 г двузамещенного мышьяковистого натрия (Na2HAsO4), вносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят дистиллированной водой до метки; полученный раствор содержит 200 мкг мышьяка в 1 мл.

Рис. 1. Прибор для отгонки и поглощения мышьяка

1 – капельная воронка с каплеуловителем (а) и холодильником (б);


загрузка...