Оптимизация оценки качества производителей карповых рыб в аквакультуре (02.11.2009)

Автор: Залепухин Валерий Владимирович

в) процент выхода предличинок – на стадиях вращающегося эмбриона, незадолго до вылупления.

Все просчеты осуществлялись в камере Богорова, в каждой партии икры просматривалось не менее 100 развивающихся икринок.

г) длину предличинок при вылуплении и при переходе на внешнее питание – под окуляр-микрометром, сразу после фиксации их 4%-ным раствором формалина (n = 50 для каждой самки).

В ходе анализа нами были выделены следующие группы икры в соответствии с ее рыбоводным качеством:

Группа 0 («фоновая» группа), в которой изучались гематологические характеристики производителей в период, предшествующий нерестовой кампании – за 5-20 дней до применения экзогенной стимуляции созревания половых продуктов.

В группах I – VII проведено одновременное изучение крови производителей, получаемой от них икры различного качества и жизнестойкости личинок.

Группа I – «недозрелая» икра. Соответствует подфазе Е1 – незавершенной IV СЗГ. У сазана и карпа характеризуется малым количеством полостной жидкости («густая» икра) и отцеживается малыми порциями. При обесклеивании образует трудно разбиваемые комки.

У растительноядных рыб овариальной жидкости, наоборот, много, икринки мелкие и упругие по тактильным ощущениям.

На контрольных гистологических препаратах и у карпа, и у растительноядных рыб не у всех самок в такой икре отмечен заметный сдвиг ядра к оболочке.

Развитие осемененной икры характеризуется появлением разноразмерных бластомеров, большим количеством уродливых эмбрионов, погибающих задолго до вылупления. Процент оплодотворения низкий, не превышает 50%, процент нормально развивающихся эмбрионов близок к нулю. У сазана и растительноядных рыб вылупившихся предличинок мало.

Группа II и III – «Зрелая икра», соответствующая IV завершенной СЗГ и подфазе Е2 . Отцеживание икры быстрое. После оплодотворения дробление синхронное и равномерное, уродливых эмбрионов мало. К группе II (икра хорошего рыбоводного качества) отнесена икра с процентом оплодотворения 50-70%, высоким процентом нормально развивающихся эмбрионов (80-90%) и близким к нормативному процентом выхода предличинок (от 30 до 60%). В группу III (икра отличного рыбоводного качества) выделена икра с максимальной оплодотворяемостью (более 70%), наиболее высокими показателями нормально развивающихся эмбрионов (от 80% до 100%) и выхода предличинок (более 60%). Группы, следовательно, выделены по отношению к важнейшим рыбоводным характеристикам, выявляемым в ходе инкубации.

Группы IV и V – «постовулярно перезревшая икра» (передержанная в полости тела самки после овуляции при несвоевременном отцеживании). Соответствует IV СЗГ и IV – VI СЗГ. Характеризуется большими и заметно набухшими икринками, среди которых встречаются уже побелевшие, легко деформируемыми при нажатии, Дробление асинхронное, бластомеры разной формы часто отрываются от бластодиска. Процент оплодотворения может быть и низким, и высоким, но из-за множества уродливо развивающихся эмбрионов процент выхода предличинок незначителен (5-10%). К группе IV отнесена икра, сохранившая способность к оплодотворению (подфаза Е2), а к группе V – полностью ее утратившая (подфазы Е3 – F). У сазана и карпа до 10% икринок такую способность сохраняют вследствие асинхронного характера созревания ооцитов и выметывания икры.

В группу VI выделены самки с постовулярно перезревшей икрой, потерявшей способность к оплодотворению и отцеженной у специально отсаженных самок спустя 8 часов после завершения очередного тура инкубации. Аналогично в группе VII такая икра отцежена через 48 часов.

Всего за период исследований полный биологический и биохимический анализ самок, икры и личинок проведен для 95 самок карпа, 123 - белого амура и 167 - пестрого толстолобика, относящихся к местным пользовательным стадам, причем по каждой самке проанализировано свыше 70 параметров (биометрических и физиолого-биохимических). В общей сложности проведено свыше 1800 биохимических анализов. Кроме того, в экспериментальных работах с производителями, завезенными с естественных водоемов, такому же анализу подвергнуты 139 самок сазана и 68 самок пестрого толстолобика, использованных в дальнейшем для искусственного воспроизводства. Гематологическому и биохимическому анализу (определение количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов; СОЭ; общего белка, липопротеидов, коллоидоустойчивости сывороточных белков (КСБ) и др.) в общей сложности подвергнуто 36 самок карпа, 30 самок белого амура, 68 самок пестрого толстолобика. При этом применялся метод прижизненного взятия крови (Попов, 1972) и иногда – каудэктомия; в анализе использовались сыворотки без признаков гемолиза.

гемоглобин – по Г.З. Дервизу и А.И. Воробьеву (1960) на фотоэлектроколориметрах ФЭК-56М и КФК-2М;

количество эритроцитов и лейкоцитов – путем просчета в камере Горяева (Голодец, 1955, Кудрявцев и др., 1969; Лабораторные методы…, 1987);

СОЭ – в аппарате Панченкова (Голодец, 1955);

общий белок – по Lowry et all., (1951) и по биуретовой реакции (Биохимические методы…, 1969);

?-липопротеиды и ?-липопротеиды – по методике О.Н. Никольской и В.П. Тихонова (1968), основанной на определении их по Бурштейну и Самаи (Биохимические методы…, 1969) - на фотоэлектроколориметрах «Specol», КФК-2М и ФЭК-56М,

КСБ – по ленте Вельтмана (Кычанова, Герфанова, 1981);

общие липиды в сыворотке крови – с сульфофосфованилиновым реактивом (Колб, Калашников, 1976)

фосфоглицериды в сыворотке крови – по Свенбергу и Свеннерхольму (1961) на спектрофотометрах СФ-26 и СФ-4А;

холестерин в сыворотке – методом Илька (I?ca, 1961);

общий фосфор в сыворотке – по Г.А. Грибанову и Г.А. Базанову (1976); кальций – по Де Ваарду (Васильева, 1983).

Общий биохимический состав икры (содержание воды, сухого вещества, белка, липидов, золы) определяли по общепринятым методам. Количество общего белка в икре определяли по Lowry et all., (1951), а в полевых условиях – по биуретовой реакции (Биохимические методы…, 1969); фракционный состав белков – методом электрофореза в блоке 5%-ного полиакриламидного геля (по Г. Мауреру, 1971) в сравнении с параллельной разгонкой белков сыворотки крови человека. Общие липиды определяли по методу Фолча (Folch et all., 1957), а их фракционный состав – методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Si?ufo?» (Сторожук, 1980). Идентификацию фракций липидов проводили по «маркерам-свидетелям», в качестве которых использовались растворы свободного холестерола, смеси пальмитиновой и олеиновой кислот, триолеина как представителя триацилглицеринов (Римш, 1969; Сидоров и др., 1972, 1981). Количество фосфоглицеридов и общего холестерола определяли (в качестве дополнительного метода) по цветным реакциям на спектрофотометре СФ-26 и спектроколориметре «Specol» по Свенбергу и Свеннерхольму (1961) и Ильку (1961) соответственно (Биохимические методы…, 1969). ?- липопротеиды в икре – по Бурштейну и Самаи. Количество гликогена определялось по методике М.И. Прохоровой и З.Н. Тупиковой (1965) с антроновым реактивом.

Количественное определение микроэлементов (меди, цинка, кобальта, никеля, марганца) проведено на атомно-абсорбционном спектрофотометре фирмы «Hitachi» модели AAS 180-50. На том же приборе в режиме пламенной фотометрии определено содержание натрия и калия. Магний и марганец в икре определены методом эмиссионного спектрального анализа в модификации В.И. Воробьева (1975).

Опыты по определению выживаемости не питавшихся личинок проводили в кристаллизаторах объемом 1 литр при n = 100 ± 2 штуки для каждой самки. Температура воды и гидрохимический режим в экспериментальных условиях соответствовали условиям инкубации каждого вида. Фиксировалось время гибели 50% и 100% всех не питавшихся личинок (L 50 и L 100) – в часах. Проанализирована выживаемость личинок, полученных от 91 самки карпа и сазана, 61 самки пестрого толстолобика различного происхождения.

Собранный материал обработан статистически по Н.А. Плохинскому (1961) и Г.Ф. Лакину (1990). Линейные корреляции, нелинейные регрессии и оценка силы влияния факторов рассчитаны на ЭВМ ЕС-1020 и ЕС-1022, а также с использованием стандартного пакета программ Microsoft Excel на персональных компьютерах различных типов.

Э К С П Е Р И М Е Н Т А Л Ь Н Ы Е И С С Л Е Д О В А Н И Я

Глава 3. Разнокачественность производителей карповых рыб.

3.1. Морфометрические и репродуктивные показатели производителей в условиях искусственного воспроизводства. В условиях ежегодной бонитировки маточных стад при анализе экстерьерных признаков производителей выявлена значительная разнородность маточных стад по основным параметрам – возрасту, массе, длине рыб и ряду индексов. В условиях искусственного воспроизводства при экзогенной стимуляции процессов созревания и овуляции сохраняются общебиологические закономерности – высокодостоверные корреляции массы, длины и рабочей плодовитости с возрастом рыб. Однако высококачественную зрелую икру можно получить от представителей почти всего возрастного ряда, за исключением впервые созревающих рыб – в экологических условиях V и VI зон рыбоводства карп и сазан становятся половозрелыми в возрасте 3-4 лет, белый амур в 5 лет, пестрый толстолобик – в 6 лет (Сборник …, 1986).

Объективным критерием высокого качества самок и отражением их эндогенной разнокачественности может служить рабочая плодовитость – как абсолютная (индивидуальная), так и относительная (рассчитанная на 1 кг массы). Данный показатель является «функцией отклика» организма рыб на экзогенную стимуляцию созревания, зависящей от степени зрелости гонад перед инъецированием и в то же время от реакции собственной нейро-гуморальной системы – то есть от уровня подготовленности к нересту. В различных экологических условиях V и VI зон рыбоводства увеличение рабочей плодовитости ведет к повышению процентов оплодотворения, нормально развивающихся эмбрионов и выхода предличинок, а также длины вылупляющихся предличинок, что особенно ярко выражено у растительноядных рыб. На наш взгляд, такие сильные корреляции являются свидетельством важного значения однородности ооцитов, синхронности их созревания и дружной нерастянутой овуляции – это лишний раз подчеркивает особую роль состояния гонад перед инъецированием. В свою очередь, уменьшение вариабильности диаметра ооцитов может указывать на более или менее равномерное распределение эссенциальных веществ в гонадах, и тотальная овуляция под действием экзогенного стимулирования созревания может охватить максимальное количество яйцеклеток. Дружная единовременная овуляция, по-видимому, является следствием лучшей подготовленности ооцитов к ней, с одной стороны, и оптимальным ответом нейро-гуморальной системы на внешнее стимулирование, с другой. Наибольшая рабочая плодовитость связана с определенной степенью зрелости ооцитов, которые характеризуются завершенностью мейотических преобразований в них и достаточным уровнем накопления структурных и энергетических веществ. Такие данные подчеркивают необходимость отбора в селекционных целях высокоплодовитых самок сазана, карпа, белого амура и пестрого толстолобика.

3.2. Физиолого-биохимические параметры крови. Анализ физиологического состояния рыб по разнообразным параметрам крови показал высокую лабильность многих показателей (табл. 1). Статистический анализ однозначно указывает лишь на чётко отличаемый минимум КСБ (коллоидоустойчивость сывороточных белков) у самок обоих видов, продуцирующих высококачественную икру (II – III группы). Например, у таких самок карпа в крови содержится меньше ?- и ?-липопротеидов по сравнению с рыбами c недозрелой (I группа) или с постовулярно перезревшей икрой – IV и V групп (Р < 0,05). Хорошо заметные отличия имеются по многим другим характеристикам.

Таблица 1

Гематология самок с икрой различного качества

Физиолого-биохимические

показатели крови Группы самок с икрой различного качества

I II - III IV - V

Украинский карп (n = 36)

Гемоглобин, г% 7,18 ± 0,24 8,77 ± 0,45 8,70 ± 1,12


загрузка...